Продукти харчові. Методи виявлення та визначення кількості бактерій виду Escherіchіa colі

НАЦІОНАЛЬНИЙ СТАНДАРТ УКРАЇНИ

ПРОДУКТИ ХАРЧОВІ

Методи виявлення та визначення кількості
бактерій виду Escherichia coli

(ГОСТ 30726-2001, IDT)

ДСТУ ГОСТ 30726-2002

Видання офіційне

Київ

ДЕРЖСТАНДАРТ УКРАЇНИ

2002

ПЕРЕДМОВА

1 ВНЕСЕНО Українським науково-дослідним інститутом стандартизації, сертифікації' та інформатики 2 НАДАНО ЧИННОСТІ наказом Держстандарту України від 24 липня 2002 р. № 462 з 2003-01-01 З СТАНДАРТ ВІДПОВІДАЄ ГОСТ 30726-2001 Продукты пищевые. Методы выявления и опреде­ления количества бактерий вида Escherichia coli (Продукта харчові. Методи виявлення та визна­чення кількості бактерій виду Escherichia coli)
Ступінь відповідності — ідентичний (IDT)
Цей стандарт видано на підставі «Угоди про проведення узгодженої політики у сфері стандарти­зації, метрології та сертифікації» від 12.03.1992 р.

4 ВВЕДЕНО ВПЕРШЕ

5 ОФОРМЛЕННЯ: А. Павленко
Право власності на цей документ належить державі.
Відтворення, тиражування та розповсюдження документа повністю чи частково
на будь-яких носіях без офіційного дозволу заборонено.
Стосовно регулювання прав власності звертатись до Держстандарту України
Держстандарт України, 2002
II

НАЦІОНАЛЬНИЙ ВСТУП

Цей національний стандарт ідентичний міждержавному стандарту ГОСТ 30726-2001 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий вида Escherichia coli (Продукти харчові. Методи виявлення та визначення кількості бактерій виду Escherichia coli).
Стандарт містить вимоги які відповідають чинному законодавству.
До стандарту внесено такі редакційні зміни:
) на другій сторінці обкладинки вилучено інформацію щодо надання чинності цьому міждер­жавному стандарту в Російській Федерації (п. З Предисловия) та інформацію щодо заборони відтво­рення, тиражування і розповсюдження як офіційного видання на території Російської Федерації без дозволу Держстандарту Росії;
) вилучено інформацію стосовно коду УДК, коду ОКП, групи згідно з КГС та вихідні дані організації-видавця Російської Федерації.
ГОСТ 30519-97/Р 50480-93 не прийнято як національний стандарт і чинний замість нього документ в Україні відсутній. Копію зазначеного документа можна отримати в Головному фонді нормативних документів.
Ill

ГОСТ 30726-2001

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Методы выявления и определения количества
бактерий вида Escherichia coli
Издание официальное

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ

ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

Минск
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овоще­сушильной промышленности (ВНИИКОП) и МТК 93 «Продукты переработки плодов и овощей»
ВНЕСЕН Госстандартом России
2 ПРИНЯТ Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол № 19 от 24 мая 2001 г.)
За принятие проголосовали:
Наименование государства
Наименование национального органа по стандартизации
Азербайджанская Республика Республика Армения Грузия
Республика Казахстан Кыргызская Республика Республика Молдова Российская Федерация Республика Таджикистан Туркменистан Республика Узбекистан Украина
Азгосстандарт
Армгосстандарт
Грузстандарт
Госстандарт Республики Казахстан
Кыргызстандарт
Молдовастандарт
Госстандарт России
Таджикстандарт
Главгосслужба «Туркменстандартлары»
Узгосстандарт
Госстандарт Украины |

3 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

© ИПК Издательство стандартов, 2001
Содержание
1 Область применения 1
2 Нормативные ссылки 1
3 Сущность методов 1
4 Отбор и подготовка проб 2
5 Аппаратура, материалы, реактивы (в т.ч. индикаторы) 2
6 Подготовка к анализу 2
7 Проведение анализа 3
8 Обработка результатов анализа 5
Приложение А Основные дифференцирующие признаки видов рода Escherichia 6

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Методы выявления и определения количества бактерий вида Escherichia coli
Food-stuffs. Methods for detection and determination of Escherichia coli
Дата введения 2002—07—01 Дата введения в Украине 2003-01-01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления в определенной навеске пищевого продукта бактерий вида Excherichia coli (E.coli) и три метода определения их количества: метод наиболее вероятного числа (НВЧ) и методы посева в или на агаризованные селективно-диагностические среды.
Выбор метода определения количества E.coli зависит от предполагаемой обсемененности продукта бактериями семейства Enterobacteriaceae и осуществляется в соответствии с требованиями ГОСТ 30518.
2 Нормативные ссылки
8 настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 9284—75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия
ГОСТ 10444.1—84 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе
ГОСТ 24104—88 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия
ГОСТ 26668—85 Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологичес­ких анализов
ГОСТ 26669—85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов
ГОСТ 26670—91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов
ГОСТ 29184—91 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий семейства Enterobacteriaceae
ГОСТ 30425—97 Консервы. Метод определения промышленной стерильности
ГОСТ 30518—97/Р 50474—93 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количе­ства бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)
ГОСТ 30519—97/Р 50480—93 Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella
3 Сущность методов
Методы выявления и определения НВЧ E.Coli основаны на высеве определенного количества продукта и (или) разведений навески продукта в жидкую селективную среду с лактозой, инкубиро­вании посевов, учете положительных колб (пробирок), пересеве культуральной жидкости на поверх­ность агаризованной селективно-диагностической среды для дальнейшего подтверждения по биохимическим и культуральным признакам роста принадлежности выделенных колоний к E.coli.
Издание официальное
Методы определения количества E.coli посевом в или на агаризованные селективно-диагнос­тические среды основаны на высеве определенного количества продукта или его разведений в или на агаризованную селективно-диагностическую среду, инкубировании посевов, подсчете типичных для E.coli колоний, подтверждении по биохимическим и культуральным признакам роста принад­лежности выделенных колоний к E.coli.
4 Отбор и подготовка проб
Отбор и подготовка проб — по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669.
5 Аппаратура, материалы, реактивы (в т.ч. индикаторы)
Для проведения анализа применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:
весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания до 1 кг и допустимой погрешностью ±10 мг (для взвешивания продукта) и весы с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности (для взвешивания реактивов);
микроскоп биологический с приспособлением для фазово-контрастного микроскопирования, обеспечивающий увеличение 900—1000х;
петлю бактериологическую;
поплавки (трубки Дархема);
стекла предметные по ГОСТ 9284;
термостаты с диапазоном рабочих температур 28—55 °С, позволяющие поддерживать заданную температуру с допустимой погрешностью ±1 °С;
бриллиантовый зеленый;
генцианвиолет;
желчь говяжью сухую или натуральную;
магний сернокислый;
метиловый красный;
метиловый фиолетовый;
натрий-аммоний фосфорнокислый двузамещенный;
сорбит,
феноловый красный;
целлобиоза.
6 Подготовка к анализу
6.1 Приготовление растворов реактивов
6.1.1 Реактив Кларка: 0,1 г метилового красного растворяют в 300 см3 этилового спирта и добавляют 200 см3 дистиллированной воды. Реактив хранят в посуде из темного стекла не более 1 мес при температуре (4±2) °С.
6.1.2 Реактивы Ковача и Эрлиха готовят по ГОСТ 30519.
6.1.3 Спиртовой раствор а-нафтола готовят по ГОСТ 30519.
6.1.4 1.4 Приготовление индикаторных бумажек для обнаружения индола: 3—5 г парадиметилами­нобензальдегида, 10 см3 концентрированной фосфорной кислоты и 50 см3 этилового спирта тща­тельно перемешивают в фарфоровой ступке. В полученном растворе смачивают полоски фильтровальной бумаги, высушивают и нарезают узкими полосками шириной около 1 см. Цвет полученных бумажек — желтый. Индикаторные бумажки хранят не более 1 мес в темном месте.
6.1.5 Раствор гидроокиси калия массовой концентрации 400 г/дм3: 40 г гидроокиси калия переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки.
6.1.6 Реактивы и растворы для окраски по Граму готовят по ГОСТ 10444.1.
6.2 Приготовление питательных сред
6.2.1 Бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью готовят по ГОСТ 30518.
6.2.2 Бульон Мак-Конки готовят по ГОСТ 30518.
6.2.3 Бульон глюкозо-фосфатный, сухой промышленного производства.
6.2.4 Бульон мясо-пептонный с триптофаном: 0,05 г L-триптофана растворяют в 100 см3 мясо-пептонного бульона, приготовленного по ГОСТ 10444.1, разливают в пробирки по 6—7 см3 и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
6.2.5 Бульон Хоттингера готовят по ГОСТ 10444.1.
6.2.6 Среду Кесслер готовят по ГОСТ 30518.
6.2.7 Среда Кларка: в 1 дм3 дистиллированной воды при нагревании растворяют 5,0 г пептона, 5,0 г глюкозы, 5,0 г фосфорнокислого двузамещенного калия, охлаждают до 45—55 °С и устанавли­вают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С (7,2±0,1). Среду разливают по 5—6 см3 в пробирки и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 15 мин или дробным методом — текучим паром по 30 мин три дня подряд.
6.2.8 Среда (типа Клиглера) для первичной дифференциации энтеробактерий, сухая промыш­ленного производства.
6.2.9 Среда Козера: в 1 дм3 дистиллированной воды при нагревании растворяют 1,5 г фосфор­нокислого двузамещенного натрия-аммония, 1,0 г фосфорнокислого однозамещенного калия, 0,2 г сернокислого магния и 2,5 г лимоннокислого натрия, охлаждают до 45—55 °С и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (7,2±0,1) при 25 °С. Среду стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 15 ми