Текст документа
ГОСТ 10444.1-84
Группа Н09
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
КОНСЕРВЫ
Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред,
применяемых в микробиологическом анализе
Canned food. Preparation of reagent solutions, dyes, indicators and culture media
for microbiological analysis
ОКСТУ 9109
Дата введения 1985-07-01
ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 17.01.84
Ограничение срока действия снято по протоколу N 4-93 Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 4-94)
ВЗАМЕН ГОСТ 10444.1-75
ИЗДАНИЕ с Изменением N 1, утвержденным в июле 1990 г. (ИУС 11-90)
Настоящий стандарт распространяется на методы приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ
1.1. Для приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред (если нет специальных указаний) применяют:
воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72;
реактивы квалификации х. ч. и ч. д. а. по ГОСТ 13867-68;
вспомогательные реактивы и растворы по ГОСТ 4517-87;
растворы индикаторов по ГОСТ 4919.1-77.
1.2. Растворы реактивов, красок, индикаторов приготовляют, используя стеклянную, лабораторную, мерную посуду, вымеренную для слива, класса А; для приготовления питательных сред (если нет специальных указаний) используют стеклянную лабораторную мерную посуду, вымеренную для слива, класса Б.
, промывают водопроводной, а затем дистиллированной водой и автоклавируют при температуре (121±1) °С в течение 1 ч.
1.4. Если в технологии приготовления питательных сред не указаны условия растворения питательных сред или компонентов, то их растворяют при перемешивании в воде комнатной температуры до полного растворения не менее 15 мин и затем, при необходимости, нагревают до растворения среды или ее компонентов.
, по каплям прибавляя при перемешивании раствор к питательной среде и определяя значение рН в периодически отбираемой пробе потенциометрически или с помощью индикатора. Значение рН питательных сред при стерилизации может изменяться. При подщелачивании среды щелочью рН после кипячения и стерилизации снижается примерно на 0,2, а при приготовлении сред с настоем печени - на 0,3-0,4. Поэтому при приготовлении сред устанавливают рН на 0,2-0,4 выше заданного, кипятят, пока рН не понизится на 0,2-0,3, снова проверяют рН, исправляют, при необходимости, и стерилизуют в автоклаве. Обязательно проверяют рН после стерилизации.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
1.6. Питательные среды, если нет специальных указаний, стерилизуют по ГОСТ 26668-85.
1.7. Готовые питательные среды хранят, если нет специальных указаний, при комнатной температуре не более 3 сут и при температуре около 4 °С не более одного месяца.
2. АППАРАТУРА
Для приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред применяются:
автоклав для стерилизации питательных сред;
стерилизатор паровой медицинский по ГОСТ 19569-89;
пластины асбестовые фильтрующие и стерилизующие по ГОСТ 480-78;
баня водяная с терморегулятором, позволяющая поддерживать температуру от 20 до 100 °С с отклонением до 1 °С от заданной;
весы лабораторные по ГОСТ 24104-88*;
____________
* С 01.07.2002 г. вводится в действие ГОСТ 24104-2001.
воронки для горячего фильтрования;
воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82;
гомогенизатор или смеситель лабораторный;
горелка газовая или спиртовка по ГОСТ 25336-82;
дистиллятор электрический марки Д N 9;
капельницы;
кастрюли разные;
колбы плоскодонные конические или круглые разной вместимости по ГОСТ 25336-82;
кюветы разные для окрашивания препаратов;
марля медицинская по ГОСТ 9412-93;
мясорубка по ГОСТ 4025-95;
ножи;
ножницы;
палочки стеклянные по ГОСТ 25336-82;
пинцеты по ГОСТ 21241-89;
пипетки Мора;
пипетки разной вместимости;
плитка электрическая по ГОСТ 14919-83;
рН-метр;
пробирки разной вместимости по ГОСТ 25336-82;
промывалка;
рефрактометр;
ареометр по ГОСТ 18481-81;
сетки асбестовые;
стекла часовые;
ступки фарфоровые по ГОСТ 9147-80;
термометры химические от 0 до 50 °С и от 50 до 100 °С по ГОСТ 28498-90;
термостаты, позволяющие поддерживать температуру в пределах от 28 до 55 °С с отклонением до 0,5 °С от заданной;
фильтры Зейтца;
фильтры мембранные N 2;
;
холодильник по ГОСТ 16317-87;
(3000 об/мин);
цилиндры разной вместимости по ГОСТ 1770-74;
часы песочные ОСТ 25-11-38-84;
чашки Петри бактериологические по ГОСТ 25336-82;
шкаф сушильный;
шпатели металлические;
шпатели стеклянные;
шприцы по ГОСТ 22967-90.
3. РЕАКТИВЫ, РАСТВОРЫ И МАТЕРИАЛЫ
Для приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред применяются:
агар микробиологический по ГОСТ 17206-96;
агар сухой питательный;
аммоний лимоннокислый;
аммоний щавелевокислый 1-водный по ГОСТ 5712-78;
ацетон по ГОСТ 2603-79;
бром по ГОСТ 4109-79;
бромкрезолпурпур;
бромтимоловый синий;
водорода пероксид по ГОСТ 10929-76;
бумага фильтровальная по ГОСТ 12026-76;
вата гигроскопическая медицинская по ГОСТ 5556-81;
вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72;
глицин;
глицерин по ГОСТ 6824-96;
глюкоза по ГОСТ 6038-79;
дрожжи хлебопекарные прессованные по ГОСТ 171-81;
желатин пищевой по ГОСТ 11293-89;
железоаммонийные квасцы;
железо (II) сернокислое 7-водное по ГОСТ 4148-78;
железо треххлористое 6-водное по ГОСТ 4147-74;
инфузорная земля;
йод по ГОСТ 4159-79;
калий азотнокислый по ГОСТ 4217-77;
калий двухромово-кислый по ГОСТ 4220-75;
калий сернокислый по ГОСТ 4145-74;
калий йодистый по ГОСТ 4232-74;
калий углекислый по ГОСТ 10690-73;
калия теллурит;
калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198-75 или двузамещенный 3-водный по ГОСТ 2493-75;
кальций углекислый по ГОСТ 4530-76;
капуста по ГОСТ 1724-85;
картофель по ГОСТ 7176-85;
кислота аскорбиновая;
кислота лимонная пищевая по ГОСТ 908-79;
кислота молочная пищевая по ГОСТ 490-79;
кислота серная по ГОСТ 4204-77;
кислота соляная по ГОСТ 3118-77;
кислота уксусная по ГОСТ 61-75;
крахмал растворимый по ГОСТ 10163-76;
кристаллический фиолетовый;
кровь кролика;
кровь крупного рогатого скота, лошади или барана;
лакмус или лакмоид;
лактоза;
литий хлористый 6-водный;
маннит;
масло вазелиновое медицинское по ГОСТ 3164-78;
медь (II) сернокислая 5-водная по ГОСТ 4165-78;
молоко коровье пастеризованное по ГОСТ 13277-79;
мясо говядина по ГОСТ 779-55, мясо баранина по ГОСТ 1935-55;
мясо-телятина по ГОСТ 779-55;
мясо-конина по ГОСТ 27095-86;
мука кукурузная по ГОСТ 14176-69;
натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77;
натрий лимоннокислый трехзамещенный по ГОСТ 22280-76;
натрия пируват;
натрий сернистокислый;
натрий углекислый по ГОСТ 83-79;
натрий фосфорнокислый двузамещенный по ГОСТ 11773-76 и однозамещенный 2-водный по ГОСТ 245-76;
натрий уксуснокислый 3-х водный по ГОСТ 199-78;
натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;
натрия азид;
1-нафтол;
парадиметиламинобензальдегид;
парафин по ГОСТ 23683-89;
панкреатин (порошок, в 1 г - 25 ед.);
поджелудочная железа убойного скота;
пирогаллол;
плазма крови кроличья или человеческая;
пепсин;
пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805-76;
печень говяжья, телячья, кроличья, не содержащая ингибиторов, роста микроорганизмов;
рыба треска или пикша, судак, щука по ГОСТ 814-96;
сахароза по ГОСТ 5833-75;
сафранин: О или Т;
солод ячменный;
соль закиси железа и аммония двойная сернокислая - соль Мора по ГОСТ 4208-72;
спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67*;
____________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.
спирт этиловый сырец по ГОСТ 131-67;
сок томатный по ГОСТ 937-91;
трипсин;
триптон;
триптический гидролизат казеина;
триптофан;
2, 3, 5-трифенилтетразолиум хлорид;
уголь активный по ГОСТ 4453-74;
фенолфталеин (индикатор);
фуксин (основной и кислый);
хлороформ по ГОСТ 20015-88;
цистеина гидрохлорид;
экстракт дрожжевой сухой;
экстракт мясной;
яйца куриные по ГОСТ 27583-88.
4. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАСТВОРОВ РЕАКТИВОВ, КРАСОК, ИНДИКАТОРОВ И КОМПОНЕНТОВ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
4.1. Агар голодный
дистиллированной воды, стерилизуют при температур (121±1) °С в течение 20 мин.
Применяют для наслаивания на посевы с целью предотвращения соприкосновения посевов с кислородом воздуха.
4.2. Взвесь (эмульсия) яично-желточная в физиологическом растворе.
физиологического раствора.
Добавляют к питательным средам для определения лецитиназной активности микроорганизмов.
Допускается яично-желточную эмульсию приготовлять следующим образом: свежие куриные яйца моют, ополаскивают холодной водой, опускают в раствор этилового спирта с объемной долей 70% и высушивают. Соблюдая правила асептики, разбивают каждое яйцо в стерильную чашку Петри и отделяют желток от белка. Помещают желток в стерильную колбу или флакон с четырьмя объемами стерильной воды и энергично перемешивают. Нагревают смесь на водяной бане при температуре (45±1) °С в течение 2 ч, оставляют на 18-24 ч при температуре от 0 до плюс 5 °С для формирования осадка.
Соблюдая правила асептики, собирают эмульсию над осадком. Эмульсию хранят при температуре от 0 до плюс 5 °С не более 72 ч.
4.3. Вода бромная
дистиллированной воды. Приготовляют бромную воду в вытяжном шкафу. Хранят в темной склянке с притертой пробкой в защищенном от света месте.
Применяют в качестве индикатора при определении содержания триптофана в питательных средах. При наличии триптофана в присутствии 3-4 капель бромной воды жидкость принимает розово-фиолетовую окраску.
4.2, 4.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).
4.4. Вода пептонная
в колбы. Затем стерилизуют 20 мин при температуре (121±1) °С.
, водные растворы
и доводят объем до метки. Разливают приготовленный раствор глюкозы в стерильные пробирки и стерилизуют при температуре (112±1) °С в течение 15 мин или при температуре (100±1) °С в течение 3 сут по 30 мин, или фильтрованием через мембранный фильтр.
Применяют в качестве источника углеводов в питательных средах и восстанавливающего вещества в питательных средах для анаэробных микроорганизмов.
4.6. Индикатор Андреде
и стерилизуют при температуре (100±1) °С в течение 5 мин. Индикатор должен иметь соломенно-желтый цвет. Хранят во флаконе из темного стекла (с притертой пробкой).
Применяют для приготовления среды Гисса.
4.7. Индикатор бромкрезолпурпур - щелочной раствор, готовят по ГОСТ 4919.1-77.
Применяют для определения кислотообразующей способности микроорганизмов.
4.8. Индикатор бромтимоловый синий - щелочной раствор, готовят по ГОСТ 4919.1-77.
Применяют для контроля рН питательных сред.
4.9. Кальций углекислый стерильный
Фасуют от 2 до 100 г углекислого кальция в пробирки, колбы или флаконы и стерилизуют воздухом по ГОСТ 26668-85.
Добавляют к питательным средам, предназначенным для посева в них кислотных продуктов.
готовят по ГОСТ 4517-87 и стерилизуют фильтрованием через мембранный фильтр N 2.
Применяют в качестве восстановителя, связывающего кислород в питательных средах для анаэробных микроорганизмов.
.
, растворяют и разливают в пробирки или колбы, стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
Применяют для подкисления питательных сред.
4.10, 4.11. (Измененная редакция, Изм. N 1).
4.12. Кусочки мяса, фарша, мясная вода, мясной отвар
) можно кипятить на открытом огне, часто помешивая, чтобы не произошло пригорания частичек мяса.
Большое количество лучше кипятить в котлах с паровой рубашкой. Для определения готовности смеси фильтруют сначала небольшое количество ее в пробирку через бумажный фильтр; если жидкость прозрачна, кипячение прекращают. Смесь вновь оставляют до следующего дня в холодильнике, рН охлажденной смеси доводят до 7,0-7,2, фильтруют через ткань, отжимая из кусочков мяса или фарша всю жидкость. Мясную воду или мясной отвар и кусочки мяса или фарша стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
Применяют в качестве компонентов питательных сред.
4.13. Кусочки печени, печеночная вода, печеночные отвар и бульон
печеночной жидкости (контролируя рН 7,0-7,2), разливают во флаконы, колбы или пробирки и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
Кусочки печени разрезают на более мелкие по 1,5-3 г, заливают раствором двууглекислого натрия и кипятят в течение 10-15 мин (не допуская бурного кипения). После этого кусочки печени промывают в дуршлаге под струей водопроводной воды в течение 1 ч и несколько раз дистиллированной водой. Кусочки печени: должны иметь рН 7,0-7,2; значение рН печени контролируют погружением кусочков в индикатор; бромтимоловый синий индикатор должен иметь сине-зеленую окраску. Кусочки печени фасуют в пробирки, колбы или флаконы и стерилизуют при (121±1) °С в течение 20 мин. Применяют в качестве компонентов питательных сред для анаэробных микроорганизмов.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
4.14. Лакмус водно-спиртовой раствор (лакмусовая настойка), приготовляют по ГОСТ 4919.1-77.
Добавляют в питательные среды для определения способности микроорганизмов к редукции лакмуса.
4.15. Масло вазелиновое
в пробирки или колбы и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
Применяют для наслаивания на жидкие питательные среды для анаэробных микроорганизмов.
4.16. Молоко обезжиренное
Молоко доводят до кипения, оставляют на сутки в холодильнике, освобождают от сливок, вторично доводят до кипения, вновь оставляют на 1 сут в холодильнике и вторично снимают верхний слой. Обезжиренное молоко может быть приготовлено путем сепарирования. Обезжиренное молоко разливают в стерильную посуду и стерилизуют при температуре 100 °С в течение 3 сут по 30 мин или однократно при температуре (116±1) °С в течение 20 мин. После стерилизации молоко не должно принимать коричневый оттенок.
Обезжиренное молоко применяют в качестве компонента питательных сред.
готовят по ГОСТ 4517-87.
Применяют для подщелачивания питательных сред.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
4.18. Пептонно-солевой раствор, готовят по ГОСТ 26669-85.
Применяют для приготовления разведений.
4.19. Пирогаллол, щелочной раствор, готовят по ГОСТ 4517-87.
Применяют для поглощения кислорода в емкостях, предназначенных для анаэробных микроорганизмов.
4.20. Цитратная плазма крови
.
Плазма кролика может быть заменена человеческой. Не допускается использовать плазму крови человека, которому незадолго до взятия крови вводилась глюкоза.
Человеческая плазма не может быть использована, если исследуемая культура выращивалась в атмосфере углекислоты. В обоих случаях происходит угнетение реакции плазмокоагуляции. Допускается использовать сухую цитратную плазму кролика.
Применяют для определения коагулазной способности микроорганизмов.
.
Оба раствора стерилизуют раздельно при температуре (115±1) °С в течение 30 мин.
охлажденной, регенерированной питательной среды для клостридий непосредственно перед посевом.
4.22. Раствор Люголя
, добавляя 1 г кристаллического йода, оставляют на несколько часов до полного растворения йода и после этого доводят водой объем раствора до метки.
Применяют для контроля степени осахаривания сусла.
4.23. Раствор I-нафтола
и доливают этиловым спиртом с объемной долей 96% до метки.
Раствор применяют свежеприготовленным для контроля ацетилметилкарбинола.
4.24. Раствор панкреатина
физиологического раствора и оставляют при температуре (4±1) °С на 16-17 ч. Перед применением полученную жидкость фильтруют через плотный бумажный фильтр, а затем через стерилизующую пластинку фильтра Зейтца до получения прозрачной опалесцирующей жидкости. Готовый раствор панкреатина может сохраняться при температуре (4±1) °С в течение двух недель.
раствора обычно появляется некроз участка кожи размером 0,5х0,5 см.
Раствор применяют для активации протоксина возбудителей ботулизма.
4.25. Растворы и реактивы для окраски по Граму
4.25.1. Основной красящий раствор по Хукеру
спирта;
воды; растворы смешивают и выдерживают в течение 24 ч при комнатной температуре перед употреблением.
4.25.2. Йодный раствор по Бурке
, добавляют 1 г кристаллического йода, оставляют на несколько часов до полного растворения йода и после этого доводят водой объем раствора до метки.
4.25.3. Контрастный красящий раствор
воды.
.
используют для выявления глобул в бациллярных клетках.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
4.25.5. Для удаления закрепленного основного красящего раствора используют этиловый спирт (при окраске по Хукеру) и ацетон (при окраске водным раствором кристаллического фиолетового).
4.26. Растворы и реактивы для окраски бактериальных спор
воды.
воды.
.
дистиллированной воды, а затем раствор доливают до метки дистиллированной водой.
дистиллированной воды, а затем раствор доливают до метки дистиллированной водой.
Раствор применяют для подкисления питательных сред.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
4.28. Смесь реактивов для создания анаэробных условий
Смешивают 1 г пирогаллола, 1 г углекислого безводного калия и 5 г инфузорной земли и фасуют в бумажные пакеты.
Применяют для создания анаэробных условий.
4.29. Физиологический раствор
дистиллированной воды и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
Применяют для приготовления растворов реактивов.
4.30. Реактив йодокрахмальный, готовят по ГОСТ 4517-87. Бумагу не пропитывают.
Используют в виде раствора для контроля отсутствия нитритов в питательных средах.
4.31. Парафиновая смесь
Растапливают равные количества парафина и вазелинового масла, смешивают и стерилизуют горячим воздухом при температуре (140±1) °С в течение 60 мин.
Применяют для наслаивания на жидкие питательные среды для анаэробных микроорганизмов.
4.32. Дрожжевой экстракт
вместимости. Смесь ставят в термостат (сушильный шкаф) при температуре от 58 до 60 °С на 2 сут и встряхивают 1-2 раза в сутки. Конец автолиза устанавливают по полному разжижению дрожжей. Экстракт должен иметь коричневый оттенок и приятный запах.
Добавляют в питательные среды как источник веществ, способствующих регенерации поврежденных микроорганизмов.
4.33. Раствор с объемной долей перекиси водорода 3%
, доводят объем дистиллированной водой до метки.
Раствор применяют для определения каталазной активности.
(Введен дополнительно, Изм. N 1).
5. ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
5.1. Агар Байрд-Паркер
дрожжевого экстракта.
мясо-пептонного бульона.
При использовании мясо-пептонного бульона триптон или пептон в среду не вносят.
.
После тщательного перемешивания приготовленную среду разливают в чашки Петри. Чашки со средой можно хранить не более 48 ч.
Применяют для культивирования стафилококков.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.2. Желточный агар с ТТХ
желточной эмульсии и 25 мг 2, 3, 5-трифенилтетразолиум хлорида. Смесь тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри, хранят в холодильнике не более 10 сут.
Применяют для культивирования Вас. cereus.
5.3. Капустный агар
водопроводной воды, смесь доводят до кипения, кипятят в течение 10-14 мин. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Полученный фильтрат разводят водой в два раза, добавляют к нему 20 г глюкозы, 10 г пептона, 10 г углекислого кальция расплавляют в нем при нагревании 15-20 г агара. Устанавливают рН среды 7,0-7,4, разливают в стерильные колбы. Стерилизуют 20 мин при температуре (121±1) °С.
5.4. Молочно-солевой агар
стерильного обезжиренного молока. Устанавливают рН (7,4±0,1), тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри.
Применяют для культивирования стафилококков.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.5. Печеночный агар
водопроводной воды, добавляют 10 г пептона, 5 г хлористого натрия и 20-30 г агара. Среду кипятят на слабом огне до растворения агара, устанавливают рН 6,8-7,0, разливают в пробирки или флаконы и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов.
5.6. Сахарный кровяной агар по Цейсслеру
свежевзятой стерильной дефибринированной крови крупного рогатого скота, лошадей, овец. Смесь осторожно взбалтывают, избегая образования пены и пузырей и разливают по чашкам Петри, среду подсушивают по ГОСТ 26670-91 и хранят не более 2 сут при температуре (4±1) °С. Среда должна иметь рН 7,2-7,4.
Применяют для определения гемолитической активности микроорганизмов.
5.7. Яично-желточно-азидный агар
в чашки Петри.
Применяют для культивирования стафилококков.
5.8. Яично-желточно-солевой агар
яично-желточной взвеси. Смесь тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Чашки хранят в холодильнике не более 5 сут.
Применяют для культивирования стафилококков.
5.7; 5.8. (Измененная редакция, Изм. N 1).
5.9. Глюкозо-триптонный (агар) бульон
раствора дрожжевого экстракта и при приготовлении плотных сред 12-15 г агара кипятят до полного растворения, фильтруют, охлаждают до температуры 50-60 °С, доводят рH до (7,0±0,1), добавляют 1 г глюкозы и в среду для термофилов 0,04 г бромкрезолпурпура, фасуют в колбы (плотную среду) или в пробирки (жидкую среду) и стерилизуют в автоклаве при температуре (121±1) °С в течение 15 мин.
Применяют для культивирования мезофильных и кислотообразующих термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
5.10. Картофельно-пептонный (агар) бульон
водопроводной воды, кипятят 15-20 мин, не допуская разваривания клубней, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и доводят объем фильтрата до первоначального. В фильтрате растворяют 5 г пептона, 5 г хлористого натрия и расплавляют при нагревании 15-20 г агара. Устанавливают рН 7,0-7,2. Разливают в колбы и пробирки и стерилизуют при температуре (125±1) °С в течение 30 мин. Рекомендуется контролировать стерильность среды, термостатируя ее при (55±1) °С в течение 48 ч.
Применяют для культивирования термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
5.11. Кислый протеозо-пептонный (агар) бульон
дистиллированной воды добавляют 20 г агара и нагревают при (100±1) °С до его растворения. Оба раствора стерилизуют 20 мин при температуре (121±1) °С. Перед посевом агар расплавляют, охлаждают до (50±1) °С, смешивают с таким же объемом среды и заливают посевы на чашках.
Применяют для культивирования термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
5.12. Мясо-пептонный (агар) бульон
мясной воды. Устанавливают рН 7,0-7,2, кипятят, фильтруют через бумажный фильтр. Стерилизуют при температуре (121+1) °С в течение 20 мин. При выпадении осадка в мясо-пептонном бульоне его вторично фильтруют с последующей стерилизацией.
мясо-пептонного бульона перед стерилизацией добавляют 15-20 г агара и кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения агара. Устанавливают рН 7,0-7,2, разливают в пробирки или флаконы и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
Применяют для культивирования мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
5.13. Мясо-пептонный (агар) бульон с глюкозой
мясо-пептонного бульона (агара) перед стерилизацией добавляют 1 г или 10 г глюкозы, устанавливают рН 7,0-7,2 и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
Применяют для культивирования мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов и для определения общего количества микроорганизмов подсчетом на чашках Петри.
5.14. Мясо-пептонный (агар) бульон с глюкозой и дрожжевым экстрактом
раствора дрожжевого экстракта.
Применяют для культивирования аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
5.15. Мясо-пептонный бульон с растворимым крахмалом
мясо-пептонного бульона, содержащего триптофан (положительная качественная реакция на триптофан) и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин. Среда должна иметь рН (7,1±0,1).
Применяют для культивирования кислотообразующих термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
5.16. Мясо-пептонный бульон с углекислым кальцием
среды добавляют 2 г углекислого кальция и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
Применяют для культивирования мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов при анализе кислотных консервированных продуктов.
5.17. Мясо-пептонный бульон с нитратами
в пробирки, промытые дистиллированной водой не менее пяти раз.
. Стерилизацию проводят 15 мин при (121±1) °С.
Применяют для определения нитратредуцирующей способности микроорганизмов.
5.18. Рыбо-пептонный бульон
) можно кипятить на открытом огне, часто помешивая, чтобы не произошло пригорания частичек рыбы. Большое количество лучше кипятить в котлах с паровой рубашкой. Для определения готовности рыбной воды сначала фильтруют небольшое количество ее в пробирку через бумажный фильтр. Если жидкость прозрачная, рыбная вода готова. Затем жидкость отцеживают через полотно, сюда же отжимают весь сок из вареной рыбы, добавляют кипяченой воды до первоначального объема и разливают.
полученной рыбной воды добавляют 10 г пептона, 5 г хлористого натрия. Устанавливают рН 7,0-7,2. Стерилизуют при (121±1) °С 20 мин.
5.19. Рыбо-пептонный бульон с глюкозой
рыбо-пептонного бульона перед стерилизацией добавляют 10 г глюкозы. Стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
5.20. Бульон Хоттингера и среды, его содержащие
хлороформа. Бутылки плотно закрывают пробкой и энергично встряхивают (пробку надо придерживать), ставят в термостат при температуре 37 °С на 3-4 ч. Мясо в виде мелкозернистой массы осаждается на дно бутыли. Жидкость над мясом должна быть прозрачной. Жидкость сливают, фильтруют и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин. Готовый раствор должен давать положительную реакцию на триптофан (розовое окрашивание при прибавлении двух капель бромной воды в пробирку с пробой).
воды, добавляют 5 г хлористого натрия, 0,2 г фосфорнокислого двузамещенного натрия или фосфорнокислого двузамещенного калия, кипятят 10 мин и устанавливают рН (7,6±0,1). Бульон Хоттингера разливают высоким столбиком по пробиркам или флаконам, на дно которых кладут кусочки вареного мяса или фарша, наслаивают стерильное вазелиновое масло высотой около 2,0 см и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
раствора дрожжевого экстракта, 5 г глюкозы, 5 г триптона, 15-20 г агара, устанавливают рН среды (7,1±0,1) и стерилизуют ее при температуре (121±1) °С в течение 20 мин. Перед употреблением в расплавленную стерильную среду асептически вносят 0,6 г аскорбиновой кислоты.
5.20.4. Плотную среду Хоттингера с глюкозой и дрожжевым экстрактом приготовляют по п.5.19.3, но без триптона и аскорбиновой кислоты.
5.20.5. Бульон Хоттингера и плотную среду Хоттингера с триптоном, глюкозой и дрожжевым экстрактом применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов; плотную среду Хоттингера с глюкозой и дрожжевым экстрактом - для культивирования мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
с печенью
).
Количество пепсина, прибавляемого к смеси мяса, печени и воды определяется его титром, но прибавляют его на 50% больше, чем подсчитано. Например, при титре пепсина 1:10 для расщепления 2,5 кг белка требуется 0,25 г пепсина: в действительности же его прибавляют 0,375 г.
Пепсин оставляют действовать на смесь в течение 20 ч при температуре 50 °С в водяной бане. После 20 ч воздействия пепсина на смесь она должна давать положительную биуретовую реакцию и реакцию на триптофан.
.
При положительной реакции образуется фиолетовая окраска. Реакцию на триптофан устанавливают с бромной водой (п.5.20.1).
отвара.
После растворения пептона и агара (при подогревании) вновь устанавливают рН (7,4±0,1). Бульон или агар разливают в колбы и стерилизуют при температуре (127±1) °С в течение 20 мин.
Для приготовления бульона с печенью кусочки вареной печени массой около 1-1,5 г вносят в пробирки и заливают бульоном до высоты 10-15 см. Стерилизуют при температуре (127±1) °С в течение 20 мин.
Применяют для мезофильных анаэробных микроорганизмов.
5.22. Дифференциальная улучшенная клостридиальная среда (жидкая, вязкая или плотная)
среды. Среды стерилизуют в автоклаве при температуре (121±1) °С в течение 15 мин.
основной среды.
Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов.
5.21, 5.22. (Измененная редакция, Изм. N 1).
5.23. Лакмусовое молоко
лакмусовой настойки). Лакмусовое молоко разливают по стерильным пробиркам высоким столбиком, кипятят на водяной бане в течение 15-20 мин и охлаждают для посева до температуры 45 °С.
Применяют для мезофильных клостридий при анализе молочных консервов и при культивировании С. perfringens.
5.24. Пептонная среда с глюкозой (глюкозо-пептонный бульон)
. Стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 15 мин.
Применяют для культивирования микроорганизмов и определения их способности образовывать ацетилметилкарбинол.
5.25. Печеночно-глицериновая среда
среды), устанавливают рН (7,0±0,1) и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов.
5.26. Плотная среда Бликфельдта
раствора дрожжевого экстракта, 5 г углекислого кальция, растертого в ступке непосредственно перед употреблением, доводят рН до (7,3±0,1) и добавляют 15-20 г агара. Среду разливают в стерильные колбы, затем стерилизуют в автоклаве при температуре (117±1) °С не более 20 мин.
Применяют для культивирования молочнокислых бактерий.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.27. Жидкая среда Бликфельдта
раствора бромкрезолпурпура, устанавливают рН (7,3±0,1), разливают в стерильную посуду и стерилизуют при температуре (117±1) °С не более 20 мин.
Применяют для культивирования молочнокислых бактерий.
5.28. Среда Вильсона-Блера, измененная для анаэробов
раствора железоаммонийных квасцов. Устанавливают рН 7,5-7,8. Среду разливают по чашкам Петри и чашки подсушивают в термостате по ГОСТ 26670-91.
Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов и определения их сульфитредуцирующей способности.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.29. Среда Гисса
дистиллированной воды при нагревании, фильтруют через бумажный фильтр так, чтобы раствор был прозрачным, прибавляют 10 г углевода (глюкозы, лактозы, мальтозы, маннита или сахарозы) в зависимости от выявляемой микрофлоры.
в стерильные пробирки с поплавками. Стерилизуют 20 мин при температуре (112±1) °С. Среда должна быть бесцветной или соломенно-желтого цвета без розового оттенка.
.
Применяют для определения сахаролитической способности микроорганизмов.
5.30. Среда из вареного мяса (Cocked-Meat Medium)
соляной кислоты и фильтруют. Доводят рН фильтрата до (8,2±0,1) и кипятят его в течение 3 мин.
вышеприготовленной жидкости. Стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин. После стерилизации среда должна иметь рН 7,4-7,5. Для выделения С. botulinum и сахаролитических анаэробных микроорганизмов в среду добавляют раствор глюкозы из расчета содержания ее в среде 0,5-1,0%. На поверхность среды наслаивают голодный агар, вазелиновое масло или парафиновую смесь.
Применяют для культивирования анаэробных микроорганизмов.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.31. Среда из сухого питательного агара
холодной водопроводной воды, тщательно перемешивают и кипятят на слабом огне 1-2 мин при помешивании до полного расплавления агара, не допуская пригорания в закрытом сосуде. Устанавливают рН среды 7,0-7,2. Расплавленный раствор фильтруют через вату, разливают в пробирки, флаконы или колбы и стерилизуют 20 мин при температуре (121±1) °С.
5.32. Среда из сухого питательного агара с глюкозой
.
5.33. Среда из томатного сока
расплавленного агара. Агаризованную среду вносят в чашки, содержащие 0,25 г стерильного углекислого кальция.
Применяют для культивирования молочнокислых бактерий.
5.34. Среда Китт-Тароцци
мясо-пептонного, рыбо-пептонного или печеночного бульона вносят 10 г глюкозы и 1,5 г агара, который при нагревании постепенно расплавляют (высота слоя бульона в обычных пробирках 12-13 см, в высоких 15-18 см) и стерилизуют 20 мин при температуре (121±1) °С. Требуемую величину рН проверяют до и после стерилизации. рН среды после стерилизации должно быть (7,1±0,1).
При приготовлении среды впрок вместо добавления к ней агара на поверхность среды перед стерилизацией в пробирки наслаивают 0,5-1,0 см вазелинового масла.
При применении среды Китт-Тароцци без добавления в нее агара или вазелинового масла на поверхность среды после окончания посева наслаивают голодный агар или парафиновую смесь высотой 1,0-1,5 см.
При посевах в свежеприготовленную среду Китт-Тароцци (не более 3 сут с момента приготовления) добавлять агар, вазелиновое масло или наслаивать на ее поверхность голодный агар не обязательно.
Применяют для культивирования мезофильных и термофильных анаэробных микроорганизмов.
5.35. Среда Китт-Тароцци с углекислым кальцием
В пробирки или флаконы, предназначенные для среды Тароцци, добавляют на дно щепотку углекислого кальция, стерилизуют горячим воздухом по ГОСТ 26668-85, закладывают в них кусочки мяса или печени и заливают мясо-пептонным бульоном с глюкозой, приготавливая среду Тароцци по вышеописанной технологии.
Применяют для анаэробных микроорганизмов, для посева кислотных консервированных продуктов.
5.36. Среда Китт-Тароцци с углекислым кальцием, дрожжевым экстрактом и аскорбиновой кислотой
среды.
Применяют для мезофильных и термофильных анаэробных микроорганизмов.
среды.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.37. Среда Мак-Кланг и Мак-Кой (модифицированная)
, но в этом случае водопроводная вода из среды исключается, 50 г кукурузной муки (белой или желтой), все хорошо размешивают, чтобы не было комков. Нагревают в течение 1 ч в текучем паре до полного растворения всех компонентов. Устанавливают рН 7,0-7,2, разливают и стерилизуют 1 ч при (121±1) °С.
Применяют для выявления мезофильных анаэробных и микроорганизмов при анализе консервов с рН 4,4 и ниже.
5.38. Пептонная среда с триптофаном
, устанавливают рН 6,7-6,8. Фильтруют через бумажный фильтр, добавляют 500 мкг триптофана, 5 г глюкозы, 20 г агара, нагревают до полного растворения агара и добавляют индикатор бромкрезол-пурпур и бромтимоловый синий (пп.4.7, 4.8). Разливают в стерильную посуду и стерилизуют 20 мин при температуре (116±1) °С.
5.39. Среда Роберта
, устанавливают рН (7,1±0,1), стерилизуют 3 сут подряд при температуре (100±1) °С в течение 20 мин или однократно при температуре (110±1) °С в течение 15 мин. Среда должна быть бесцветной.
Применяют для культивирования С. perfringens.
5.40. Среда Сабуро
горячей дистиллированной воды растворяют 10 г пептона и 40 г глюкозы или мальтозы, разливают в стерильную посуду и стерилизуют 20 мин при температуре (112±1) °С.
Применяют для дрожжей и плесневых грибов.
5.41. Среда Смис-Лоренца
воды и раствор вносят в среду, устанавливают рН (7,1±0,1) и стерилизуют при температуре (117±1) °С в течение 20 мин.
Применяют для культивирования аэробных и факультативно-анаэробных кислотообразующих термофильных микроорганизмов.
5.42. Крахмало-пептонная среда, обогащенная триптофаном
, разливают в стерильную посуду и стерилизуют при температуре (116±1) °С в течение 20 мин.
Применяют для культивирования кислотообразующих аэробных и факультативно-анаэробных термофильных микроорганизмов.
5.43. Сульфат-лактатная (плотная, вязкая) среда
стерилизуют фильтрованием и вносят асептически в каждую пробирку по 4-5 капель. Лактат натрия может быть заменен молочной кислотой, нейтрализованной гидроокисью натрия.
Применяют для культивирования термофильного анаэроба D. nigrificans.
5.44. Солодовое сусло
Солодовое неохмеленное сусло готовят следующим образом.
и стерилизуют 30 мин в автоклаве при 107-110 °С. Затем сусло декантируют.
Прозрачное сусло разбавляют водой до массовой доли сухих веществ 7-8%, разливают в стерильную посуду, стерилизуют 20 мин при (116±1) °С. Солодовое сусло можно заменить виноградным суслом, доводя массовую долю сухих веществ этого раствора до 7-8%.
Применяют для культивирования дрожжей и плесневых грибов.
5.45. Солодовое агаризованное сусло
до рН 3,5.
Применяют для культивирования дрожжей и плесневых грибов.
5.46. Солодовое агаризованное сусло с углекислым кальцием
солодового неохмеленного сусла с массовой долей сухих веществ 7-8% добавляют 15-20 г агара (в зависимости от его желирующей способности), растворяют его на водяной бане при нагревании, и вносят 15-20 г стерильного углекислого кальция. Устанавливают рН среды 6,6-6,8. При постоянном помешивании разливают в стерильную посуду и стерилизуют при температуре (116±1) °С в течение 20 мин.
Применяют для культивирования дрожжей, плесеней и молочнокислых бактерий.
5.47. Улучшенная клостридиальная среда (R. С. М.)
мясной воды вместо мясного экстракта и воды.
Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов.
5.48. Среда питательная для контроля стерильности, сухая.
В 33,0 г сухого порошка среды входят:
ферментативный гидролизат казеина неглубокой степени расщепления 15,0 г;
витаминный препарат экстракта кормовых дрожжей - 5,0 г;
натрий хлористый - 6,4 г;
глюкоза - 5,0 г;
тиогликолят натрия - 0,3 г;
цистеина гидрохлорид - 0,75 г;
агар - 0,6 г;
натрий углекислый - 0,5-0,95 г.
Приготовление:
воды, тщательно перемешивают, доводят до кипения, кипятят 2-3 мин при помешивании, фильтруют, разливают в пробирки по п.5.34. Стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин. Готовая среда должна иметь рН 7,0±0,2 и храниться при комнатной температуре не более 7 сут.
Среду применяют для культивирования мезофильных и термофильных анаэробных микроорганизмов.
(Введен дополнительно, Изм. N 1).
Текст документа сверен по:
официальное издание
Консервы. Методы микробиологического анализа:
Сб. ГОСТов. - М.: ИПК Издательство стандартов, 2002