ГОСТ 17.1.4.02-90
Завантажити документ
Формат .docx · доступно зареєстрованим користувачам
ХЛОРОФИЛЛА а
Издание официальное
Москва
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Институтом океанологии АН СССР, соисполнитель — Гидрохимический институт Госкомгидромета СССР
М.Е. Виноградов, член-корр. АН СССР; Б.В. Коновалов, канд. биол. наук (руководители темы); В.А. Кимстач, д-р хим. наук; А.А. Назарова, канд. хим. наук; Т.О. Гончарова, канд. хим. наук
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по охране природы от 03.07.90 № 28
Обозначение НТД, на который дана ссылка
Номер раздела, пункта
Обозначение НТД, на который дана ссылка
Номер раздела, пункта
11
4.1
12
4.5
12
4.6
2
4.3
5.10
5.4
4.2
5.9
4.4
ИСО 5667-2-83
2
5. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июль 1999 г.
Редактор М.И. Максимова
Технический редактор О.Н. Власова
Корректор С.И. Фирсова
Компьютерная верстка Л.А. Круговой
Изд. лиц. № 021007 от 10.08.95. Сдано в набор 03.08.99. Подписано в печать 09.09.99. Усл. печ. л. 1,40. Уч.-изд. л. 1,07.
Тираж 127 экз. С3628. Зак. 752.
ИПК Издательство стандартов, 107076, Москва, Колодезный пер., 14.
Набрано в Издательстве на ПЭВМ
Филиал ИПК Издательство стандартов — тип. “Московский печатник”, Москва, Лялин пер., 6.
Плр № 080102
Методика спектрофотометрического определения
хлорофилла а
Water. Spectrophotometric determination
of chlorophyll a
Дата введения 01.01.91
Хлорофилл а — основной пигмент зеленых растений, в том числе одноклеточных водорослей (фитопланктона). Из нескольких десятков пигментов, содержащихся в фотосинтетическом аппарате водорослей, хлорофиллу а отведена важнейшая роль в процессе фотосинтеза. Информация о концентрации хлорофилла а и ее изменчивости в водном объекте служит критерием при оценке запасов биомассы фитопланктона и его продукции, а также индикатором загрязнения вод. Соотношение между концентрацией хлорофилла а и продуктами его превращений, а также другими пигментами (хлорофилл Ь, хлорофилл с^+с2, каротиноиды) характеризуют физиологическое состояние водорослей.
1.1. Методика регламентирует определение содержания хлорофилла а фитопланктона в пробах вод морских и поверхностных суши. Допускается использовать данную методику для определения хлорофилла а микрофитобентоса и микрофлоры льда. Результаты определений по данному стандарту могут быть использованы для калибровки непрямых методов оценки содержания хлорофилла а, в том числе при космическом зондировании состояния водных объектов, а также при регистрации роста водорослей в биохимических экспериментах.
1.2. Методика предназначена для органов государственного контроля за состоянием водных объектов, ведомственных научно-исследовательских экологических и промысловых работ.
1.3. Диапазон определяемых концентраций хлорофилла а, для которого устанавливаются пределы допускаемой погрешности определений, выполняемых по данной методике, составляет от 0,05 мг м-3 до любых максимальных значений, встречающихся в природных водах.
1.4. Основными компонентами, мешающими анализу, являются хлорофилл Ь, хлорофилл cj+c2, феофитин а, феофорбид а и хлорофиллид а. Содержание хлорофилла Ь, хлорофилла Cq+сэ, суммарное содержание феофитина а и феофорбида а соизмеримо с содержанием хлорофилла а, поэтому поправка на присутствие этих пигментов вносится при расчете концентрации хлорофилла а. Содержание хлорофиллида а обычно несоизмеримо мало по сравнению с содержанием хлорофилла а, поэтому поправка на его присутствие не вносится.
1.5. Определяемое вещество — хлорофилл а — легко разрушается под воздействием света, при повышении температуры и в кислой среде, поэтому при проведении любых процедур, начиная с момента отбора пробы и до окончания спектрофотометрирования следует обеспечить нахождение объекта анализа (пробы, фильтра с осадком или экстракта) в затемненном прохладном месте при отсутствии паров кислоты.
1.6. Продолжительность анализа одной пробы от момента ее отбора до окончания спектрофотометрирования без учета времени хранения пробы, фильтра с осадком и экстракта не должна превышать 3 ч.
Перепечатка воспрещена
© Издательство стандартов, 1990 © ИПК Издательство стандартов, 1999
ГОСТ 17.1.5.04 Охрана природы. Гидросфера. Приборы и устройства для отбора, первичной обработки и хранения проб природных вод. Общие технические условия.
ИСО 5667-2 Качество воды. Отбор проб. Часть 2. Руководство по технике отбора проб.
В основе метода — спектрофотометрирование экстракта пигментов до и после его подкисления раствором соляной кислоты. Расчеты концентрации хлорофилла а основаны на известных удельных спектральных показателях поглощения света хлорофиллом а и основными компонентами, мешающими анализу.
Для приготовления экстракта пробу воды фильтруют через мембранный фильтр с нанесенным на нем слоем углекислого бария или магния, осадок размельчают (гомогенизируют), пигменты экстрагируют водным ацетоном из гомогената и удаляют центрофугированием из экстракта светорассеивающую взвесь.
4.1. Силикагель по ГОСТ 3956.
4.2. Ацетон ч.д.а. по ГОСТ 2603.
4.3. Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
4.4. Кислота соляная х.ч. по ГОСТ 3118.
4.5. Барий углекислый ч.д.а. по ГОСТ 4158.
4.6. Магний углекислый основной ч.д.а. по ГОСТ 6419.
4.7. Бумага фильтровальная — по нормативно-технической документации (НТД).
4.8. Фильтры мембранные размерами пор 0,6—0,9 мкм: отечественного производства «Влади- пор» типа МФА-МА №№ 6—9 (0,6—0,9 мкм) (см. приложение 1, п. 2) или типа МФЦ № 4 (0,6 мкм) по НТД; производства зарубежных фирм Synpor № 4 (0,85 мкм) или № 5 (0,6 мкм), Millipore НА, Whatman GF/F.
5.1. Спектрофотометр. Выделяемый спектральный интервал должен быть не более 2—3 нм, точность установки длин волн в диапазоне 430—750 нм не ниже ±2 нм, погрешность измерений по шкале оптических плотностей не более 0,01Б. Например спектрофотометры: двухлучевой типа СФ-18 или однолучевой типа СФ-46 по НТД.
5.2. Центрифуга лабораторная. Вместимость пробирок 10 см3, число гнезд 6(12), ускорение 4000—5000 g. Например типа ЦЛН-2 или ОПн-ВУХЛ 4.2 по НТД.
5.3. Установка фильтровальная с воронками под фильтры мембранные диаметром от 35 до 142 мм (см. приложения 3 и 4).
5.4. Гомогенизатор механический с вместимостью 10—15 см3. Ступка фарфоровая № 1—3 (диаметр 50—90 мм) с пестиком № 2 (диаметр 22—34 мм) по ГОСТ 9147. Рекомендуется также устройство из стекла, схема которого дана в приложении 5.
5.5. Насос вакуумный, типа НВР-1 или ЗНВР-1Д, или отсасыватель хирургический ОХ-10 по НТД.
5.6. Батометр (см. приложение 1, п. 1).
5.7. Канистры полиэтиленовые черного цвета вместимостью 3, 5, 10 и 20 дм3.
5.8. Ведро полиэтиленовое или эмалированное.
5.9. Эксикатор диаметром 140, 190 или 250 мм по ГОСТ 25336.
5.10. Пробирки стеклянные градуированные с притертой пробкой на 10 см3 с ценой деления 0,1 см3 по ГОСТ 1770 и НТД.
6.1. Порошок углекислого бария (ВаСОз) тщательно растирают в фарфоровой ступке с добавлением небольшого количества дистиллированной воды или фильтрованной природной. Из полученной массы удаляют самую грубую фракцию, оседающую со скоростью более 0,5 см с--1, после чего эту массу используют для приготовления суспензии. Рекомендуемая концентрация ВаСО3 в суспензии 30 г-дм-3. Порция суспензии, добавляемой в фильтровальную воронку перед фильтрованием, берется из расчета 20 мг ВаСО3 на 1 см2 поверхности фильтра.
6.2. Мембранные фильтры готовят в зависимости от типа материала фильтра. Некоторые типы фильтров выпускают готовыми к использованию (например стекловолокнистые фильтры типа GF/F), другие требуют предварительного вымачивания или даже кипячения в воде. Например фильтры типа Synpor необходимо трижды прокипятить по 10—15 мин в свежих порциях дистиллированной воды. После кипячения следует провести выбраковку деформированных фильтров. Готовые фильтры хранят в сухом состоянии.
6.3. Приготовление 1 дм3 90 %-ного водного ацетона проводят смешением 0,9 дм3 100 %-ного ацетона и 0,1 дм3 дистиллированной воды. В приготовленный раствор добавляют порцию MgCO3 из расчета 1—2 г на 1 дм3 раствора, суспензию тщательно перемешивают в течение 20—30 с и хранят не более 3—5 сут в склянках из темного стекла.
6.4. 0,5 см3 концентрированной соляной кислоты растворяют в 10 см3 ацетона. Приготовленный раствор хранят не более суток.
7.1. Объем пробы зависит от ожидаемой концентрации хлорофилла а в конкретном водном объекте и определяется в соответствии с приложением 2, при этом количество хлорофилла в пробе должно составлять от 2 до 20 мкг.
Из этих же соображений выбирается объем пробы грунта или льда при анализе микрофитобентоса или ледовой микрофлоры.
7.2. После отбора пробу необходимо немедленно профильтровать. При отсутствии такой возможности допускается хранить ее в холодильнике при температуре от 2 до 6 °С. Максимально допустимая продолжительность хранения с момента отбора — не более 2—3 ч. После хранения, перед началом фильтрования, пробу необходимо осторожно перемешать. К материалу емкости для хранения пробы предъявляются те же требования, что и к материалу для изготовления устройства для отбора пробы (см. приложение 1).
7.3. Проба воды фильтруется через мембранный фильтр (см. п. 4.8), покрытый слоем ВаСО3 (или MgCO3). Фильтрование проводится под вакуумом или под давлением (в том числе самотеком), перепад давления — 0,15—0,2 атм.
Для получения на фильтре достаточно плотного и равномерного по толщине слоя ВаСО3 и во избежание его взмучивания фильтрован