ГОСТ 30518-97
Завантажити документ
Формат .docx · доступно зареєстрованим користувачам
Группа Н09
Методы выявления и определения количества бактерий группы
кишечных палочек (колиформных бактерий)
Food products. Methods for detection and quantity determination of coliformes
МКС 07.100.30
Дата введения 1994-01-01
1 РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП) и Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 "Продукты переработки плодов и овощей"
2 ПРИНЯТ Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 11 от 23 апреля 1997 г.)
3 Настоящий стандарт соответствует ИСО 4831-78 "Микробиология. Общее руководство по подсчету колибактерий. Методика расчета наиболее вероятного значения после инкубации при 30 °С" и ИСО 4832-78 "Микробиология. Общее руководство по подсчету колиформ. Метод подсчета колоний при температуре 30 °С" в части сущности методов
4 Постановлением Госстандарта России от 16 апреля 1998 г. N 122 ГОСТ 30518-97 введен в действие в качестве государственного стандарта Российской Федерации с момента принятия указанного постановления и признан имеющим одинаковую силу с ГОСТ Р 50474-93 на территории Российской Федерации в связи с полной аутентичностью их содержания
За принятие проголосовали:
Наименование государства Наименование национального органа
по стандартизации
Республика Беларусь Госстандарт Республики Беларусь
Республика Казахстан Госстандарт Республики Казахстан
Кыргызская Республика Кыргызстандарт
Республика Молдова Молдовастандарт
Российская Федерация Госстандарт России
Республика Таджикистан Таджикстандарт
Туркменистан Главгосслужба "Туркменстандартлары"
Республика Узбекистан
Узгосстандарт
Обозначение НТД, на который дана ссылка
Номер пункта
3.1
3.1, 5.3
3.1
2
2, 5.1.1
5.1.2, 5.5, 6.3, 6.4, 6.5
5.7
Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления в определенной навеске пищевого продукта колиформных бактерий и три метода определения их количества: метод наиболее вероятного числа (НВЧ) и методы посева в или на агаризованные селективно-диагностические среды.
жидкого продукта менее 15 клеток колиформных бактерий.
жидкого продукта более 15 колониеобразующих единиц (KОЕ) колиформных бактерий.
жидкого продукта более 150 KОЕ колиформных бактерий.
1 Сущность методов
Методы выявления и определения наиболее вероятного числа колиформных бактерий основаны на высеве определенного количества продукта и (или) разведений навески продукта в жидкую селективную среду с лактозой, инкубировании посевов, учете положительных пробирок (колб), пересеве, при необходимости, культуральной жидкости на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды для подтверждения по биохимическим и культуральным признакам роста принадлежности выделенных колоний к колиформным бактериям.
Методы определения количества колиформных бактерий посевом в (на) агаризованные селективно-диагностические среды основаны на высеве определенного количества продукта или его разведений в или на агаризованную селективно-диагностическую среду с лактозой, инкубировании посевов, подсчете типичных колоний, подтверждении, при необходимости, по биохимическим признакам принадлежности выделенных колоний к колиформным бактериям.
2 Отбор и подготовка проб
Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669.
3 Аппаратура, материалы, реактивы и питательные среды
3.1 Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:
весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности (для взвешивания реактивов);
весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания 1 кг, 4-го класса точности (для взвешивания продукта);
_____________
* С 01.07.2002 г. вводится в действие ГОСТ 24104-2001.
;
петля бактериологическая;
поплавки (трубки Дархема);
стекла предметные по ГОСТ 9284;
термостат с диапазоном рабочих температур 28-55 °С, позволяющий поддерживать заданную температуру с допустимой погрешностью ±1 °С.
бриллиантовый зеленый;
генцианвиолет;
желчь говяжья сухая или натуральная;
метиловый фиолетовый;
феноловый красный.
3.2 Для проведения испытания применяют питательные среды:
агар лактозный с бриллиантовым зеленым и феноловым красным;
бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью;
бульон Мак-Конки;
бульон Кесслер;
среду Эндо.
4 Подготовка к испытанию
4.1 Приготовление растворов
дистиллированной воды.
и доводят дистиллированной водой до метки.
и доводят дистиллированной водой до метки.
и доводят дистиллированной водой до метки.
4.1.5 Растворы, приготовленные по 4.1.1-4.1.4, хранят в закрытых сосудах из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.
4.1.6. Растворы и реактивы для окраски по Граму готовят по ГОСТ 10444.1.
4.2 Приготовление питательных сред
раствора бриллиантового зеленого, приготовленного по 4.1.2, тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри, колбы или флаконы.
в колбы.
и стерилизуют 15 мин при температуре (121±1) °С.
и стерилизуют 20 мин при температуре (115±1) °С,
4.2.5 Среда Эндо: выпускается Дагестанским НПО "Питательные среды" и готовится по прописи, указанной на этикетке.
4.2.6 Жидкие среды двойной концентрации готовят по 4.2.2-4.2.4, но при приготовлении берут удвоенную массу (объем) ингредиентов, кроме дистиллированной воды, и разливают в посуду с учетом последующего количества добавляемого жидкого продукта.
5 Проведение испытания
5.1 Посевы для определения количества колиформных бактерий
) продукта предполагаемое количество колиформных бактерий или их количество, указанное в нормативном документе на конкретный продукт.
навески продукта или его разведения наносят на поверхность одной из сред, приготовленных по 4.2.1 или 4.2.5 и разлитых в две параллельные чашки Петри. Подготовку чашек Петри со средой к посеву и посев проводят по ГОСТ 26670.
При применении метода мембранных фильтров по ГОСТ 26670 фильтры переносят на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды, избегая образования пузырьков воздуха между средой и фильтром. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх.
навески продукта или его разведения вносят в две параллельные чашки Петри. Посевы заливают по ГОСТ 26670 на поверхность одной из агаризованных сред, приготовленных по 4.2.1 или 4.2.5.
5.1.3 При определении количества колиформных бактерий по методу НВЧ высевают три последовательные навески продукта и (или) его разведения, отличающиеся по количеству продукта в них в 10 раз.
Каждую навеску продукта и (или) его разведение в трехкратной повторности высевают в колбы или пробирки с одной из питательных сред, приготовленной по одному из следующих пунктов: 4.2.2, 4.2.3, 4.2.4.
Соотношение между количеством высеваемого продукта или его разведения и питательной средой 1:9, а для сред двойной концентрации - 1:1.
5.2 Посев для выявления колиформных бактерий в определенной навеске продукта
При выявлении колиформных бактерий в определенной навеске продукта или его эквивалентном разведении эту навеску или разведение вносят в одну из питательных сред, приготовленную по одному из следующих пунктов 4.2.2, 4.2.3, 4.2.4. Соотношение между количеством высеваемого продукта или его эквивалентным разведением и питательной средой 1:9, а для сред двойной концентрации - 1:1.
5.3 При испытании высококислотных продуктов для предотвращения резкого снижения рН (на 0,5 и более) питательных сред при внесении в них продукта или его разведений рН питательных сред доводят до допустимых значений с помощью стерильного раствора гидроокиси натрия, приготовленного по ГОСТ 10444.1, или при приготовлении питательных сред рН устанавливают выше заданного с учетом ее последующего снижения при внесении продукта. Количество добавляемого раствора гидроокиси натрия или величину, на которую необходимо увеличить рН при приготовлении питательных сред, устанавливают опытным путем.
5.4 Посевы на агаризованных и жидких средах инкубируют при температуре (36±1) °С в течение 24-48 ч. Чашки Петри с посевами инкубируют дном вверх. Посевы просматривают через (24±3) ч, отмечают положительные посевы в жидкие среды, а окончательный учет проводят через (48+3) ч.
Положительными считают посевы в жидкие среды, в которых имеет место интенсивный рост микроорганизмов, проявляющийся в помутнении среды, образовании газа, подкислении среды (то есть изменении цвета среды).
5.5 При необходимости, для подтверждения принадлежности микроорганизмов, выросших на жидких средах, к колиформным бактериям делают пересевы по ГОСТ 26670 на поверхность одной из агаризованных селективно-диагностических сред, приготовленных по 4.2.1 или 4.2.5. Посевы инкубируют при температуре (36±1) °С в течение (24±3) ч.
5.6 Посевы на агаризованных средах по 5.1 и 5.5 после инкубирования просматривают и отмечают рост характерных колоний.
На агаре лактозном с бриллиантовым зеленым и феноловым красным колиформные бактерии образуют ярко-желтые колонии диаметром 2-4 мм с желтой прозрачной зоной диаметром 1-3 мм вокруг колонии.
На среде Эндо колиформные бактерии образуют колонии бледно-розового или красного цвета, часто с металлическим блеском.
В посевах по 5.1.2 отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 характерных колоний. При посеве методом мембранных фильтров на них подсчитывают количество колоний и в том случае, если их менее 15.
5.7 При необходимости подтверждения принадлежности выросших микроорганизмов к колиформным бактериям из чашек Петри с посевами по 5.1 и 5.5 отбирают не менее чем по пять колоний. Из каждой отобранной колонии приготавливают мазки и окрашивают по Граму (по ГОСТ 30425).
Колиформные бактерии являются грамот