ГОСТ 30519-97
Завантажити документ
Формат .docx · доступно зареєстрованим користувачам
--------------------------
Группа Н09
Метод выявления бактерий рода Salmonella
Food products. Method for detection of Salmonella
МКС 07.100.30
Дата введения 1994-01-01
1 РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП) и Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 "Продукты переработки плодов и овощей"
2 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 26.12.93 N 24
Постановлением Госстандарта России от 16 апреля 1998 года N 122 ГОСТ 30519-97 введен в действие в качестве государственного стандарта Российской Федерации с момента принятия указанного постановления и признан имеющим одинаковую силу с ГОСТ Р 50480-93 на территории Российской Федерации в связи с полной аутентичностью их содержания
Обозначение НТД, на который дана ссылка
Номер раздела, пункта
3
3
3
3
3
3, 4.2.2, 4.2.4, 4.2.6, 4.2.9, 4.2.10, 4.2.11, 4.2.12, 4.2.13, 4.2.14, 5.1, 5.6.1
3
2
2
4.2.7, 5.3
Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления в определенной навеске продукта бактерий рода Salmonella.
1 Сущность метода
Метод выявления бактерий рода Salmonella основан на высеве определенного количества продукта в жидкую неселективную среду, инкубировании посевов, последующем выявлении в этих посевах бактерий, способных развиваться в жидких селективных средах, образующих типичные колонии на агаризованных дифференциально-диагностических средах, имеющих типичные для бактерий рода Salmonella биохимические и серологические характеристики.
2 Отбор и подготовка проб
Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669 или по нормативно-технической документации на анализируемый продукт.
3 Аппаратура, материалы, реактивы
Для проведения анализа применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1, а также указанные ниже:
весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности (для взвешивания реактивов);
_____________
* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001.
весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 1 кг, 4-го класса точности (для взвешивания продукта);
;
петлю бактериологическую;
стекла предметные по ГОСТ 9284;
стекла покровные по ГОСТ 6672;
термостат с диапазоном рабочих температур 28-55 °С, позволяющий поддерживать заданную температуру с допустимой погрешностью ±1 °С.
спирт изобутиловый по ГОСТ 9536;
бриллиантовый зеленый;
желчь сухую или натуральную;
контрольный штамп* бактерий рода Salmonella, не относящихся к тифозной группе;
________________
* Текст соответствует оригиналу.
магний хлористый по ГОСТ 4209;
мочевину по ГОСТ 6691;
сухие агглютинирующие адсорбированные поливалентные сальмонеллезные сыворотки основных групп А, В, С, Д, Е и редких групп;
феноловый красный.
4 Подготовка к анализу
4.1 Приготовление растворов и реактивов
и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.
и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.
).
изобутилового спирта.
, растворяют в этиловом спирте объемной концентрации 96% и доводят раствор этиловым спиртом до метки. Раствор готовят непосредственно перед применением.
, растворяют в этиловом спирте объемной концентрации 50% и доводят раствор этиловым спиртом до метки.
4.1.7 Сухие агглютинирующие адсорбционные поливалентные сальмонеллезные сыворотки готовят перед употреблением по прописи, указанной в прилагаемом к ним наставлении.
4.2 Приготовление питательных сред
, то есть 1:9), и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
4.2.2 Магниевая среда: готовят путем соединения трех растворов.
дистиллированной воды.
дистиллированной воды.
раствора бриллиантового зеленого, приготовленного по 4.1.1.
и стерилизуют при температуре (112±1) °С в течение 30 мин.
4.2.3 Селенитовая среда: готовят из двух растворов.
в колбы или флаконы и стерилизуют текучим паром по 30 мин в течение двух дней или при температуре (112±1) °С в течение 30 мин.
стерильной дистиллированной воды. Раствор готовят непосредственно перед употреблением.
раствора 2.
Стерилизация приготовленной среды не допускается, так как при этом происходит редукция кислого селенисто-кислого натрия, выпадает осадок красного цвета и среда становится непригодной.
Селенитовая среда выпускается в сухом виде и готовится по прописи, указанной на этикетке.
4.2.4 Тетратионатная среда (Мюллер-Кауфман)
мясо-пептонного бульона, приготовленного по ГОСТ 10444.1, помещают 4,5 г стерильного углекислого кальция. Углекислый кальций стерилизуют по ГОСТ 10444.1.
Приготовленную основу стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
основы среды асептически прибавляют:
О);
йодного раствора;
раствора бриллиантового зеленого;
раствора желчи.
Указанные растворы прибавляют к основе среды в приведенном выше порядке, перемешивая смесь после каждого прибавления.
Среду допускается использовать в течение одной недели после приготовления.
Указанные выше растворы, прибавляемые к основе среды, готовят следующим образом:
, растворяют в дистиллированной воде и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор переливают в колбу или флакон и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин или при температуре (121±1) °С в течение 20 мин;
, растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, прибавляют 20,0 г кристаллического йода, растворяют его. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки.
Раствор хранят в плотно закрытом темном сосуде;
раствор бриллиантового зеленого готовят по 4.1.1;
дистиллированной воды или используют натуральную желчь. Раствор желчи или натуральную желчь стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
4.2.5 Дифференциально-диагностические среды (сухие):
висмут-сульфит агар (Вильсон-Блера);
среду Плоскирева;
среду Эндо;
среду Левина.
Среды готовят по прописи, указанной на этикетке.
и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 10 мин.
4.2.7 Агар Кристенсена с мочевиной: среда готовится путем соединения основы среды и раствора мочевины.
дистиллированной воды, охлаждают до 45-55 °С и устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 °С 6,7±0,1.
Основу среды мерно разливают в колбы или флаконы и стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение 20 мин.
, растворяют в дистиллированной воде, объем раствора доводят дистиллированной водой до метки.
Раствор мочевины стерилизуют фильтрацией по ГОСТ 26670 или текучим паром в течение 30 мин.
.
4.2.8 После стерилизации среды, приготовленные по 4.2.6 и 4.2.7, скашивают так, чтобы оставался столбик высотой 2-2,5 см.
в пробирки.
.
.
и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
4.2.13 Среды с углеводами (среды Гисса): готовят по ГОСТ 10444.1 или используют сухие среды с углеводами, которые готовят по прописи, указанной на этикетке.
4.2.14 Мясо-пептонный агар: готовят по ГОСТ 10444.1 или используют среду, приготовленную из сухого питательного агара.
Среду из сухого питательного агара готовят по прописи, указанной на этикетке.
5 Проведение анализа
5.1 Неселективное предварительное обогащение
Навеску продукта, в массе (объеме) которой нормативно-технической документацией на анализируемый продукт предусматривается отсутствие бактерий рода Salmonella, высевают в забуференную пептонную воду, приготовленную по 4.2.1. Соотношение массы (объема) продукта и забуференной пептонной воды 1:9.
При посеве жидких высококислотных продуктов для предотвращения снижения рН питательных сред на 0,5 и более рН продукта перед посевом доводят до 7,0±0,2.
При посеве твердых высококислотных продуктов доводят рН до 7,0±0,2 в посевах.
Доведение рН проводят асептически с помощью стерильных растворов гидроокиси натрия и соляной кислоты, приготовленных по ГОСТ 10444.1. Количество добавляемого раствора гидроокиси натрия устанавливают опытным путем.
Посевы инкубируют при температуре (36±1) °С в течение 18-20 ч.
5.2 Селективное обогащение
тетратионатной среды.
Посевы инкубируют в течение 24-48 ч на магниевой и селенитовой средах при температуре (36±1) °С, а на тетратионатной среде при температуре (43±1) °С.
5.3 Выделение и идентификация культур на агаризованных дифференциально-диагностических средах
Культуры через 24 и 48 ч инкубирования по 5.2 пересевают (по ГОСТ 26670) на три агаризованные среды, приготовленные по 4.2.5: висмут-сульфит агар, среду Плоскирева и среду Эндо (или среду Левина).
Допускается использование одной чашки каждой из сред одновременного высева с двух селективных сред.
Посевы инкубируют при температуре (36±1) °С в течение 24-48 ч.
После 24 ч инкубирования посевов проводят предварительный учет результатов, а после 48 ч - окончательный.
После инкубирования посевов отмечают на дифференциально-диагностических средах рост колоний, характерных для бактерий рода Salmonella:
на висмут-сульфит агаре колонии черные с характерным металлическим блеском, а также зеленоватые с темно-зеленым ободком и с пигментированием среды под колониями;
на среде Плоскирева колонии бесцветные прозрачные, но более плотные, чем на среде Эндо;
на среде Эндо колонии круглые бесцветные или слегка розоватые, прозрачные;
на среде Левина колонии прозрачные, слабо-розовые или розовато-фиолетовые.
При отсутствии в посевах на дифференциально-диагностических средах характерных для бактерий рода Salmonella колоний дают заключение об отсутствии бактерий рода Salmonella в анализируемой навеске продукта.
При наличии хотя бы на одной дифференциально-диагностической среде характерных