ГОСТ 9.023-74
Завантажити документ
Формат .docx · доступно зареєстрованим користувачам
Издание официальное
Москв
а
Unified system of corrosion and ageing
protection. Oil fuels. Method
of laboratory testing biostability
of fuels protected by antimicrobe additives
ется по закону Несоблюдение стандарта преследу
ся на нефтяные дистил- лабораторных испытаний лятные топлива и устанавливает метод тивомикробными присад- биостойкости топлив, защищенных при
роорганизмов.
■ z Перепечатка воспрещена Издание официальное г
Переиздание, Декабрь г х — ательство стандартов, 1975
2.1. Для испытаний применяют чистые культуры гриба Clado- sporium resinae и бактерии Pseudomonas aeruginosa (pyocyanea).
Кроме того, допускается применять чистые культуры различных видов микобактерий (род Mycobacterium) и дрожжей Candida (С. guilliermondii, С. lipolytica, С. tropicalis), а также накопительные культуры, состав которых определяется источником их получения и нефтепродуктом, за счет которого они формируются.
2.2. Чистые культуры грибов и бактерий получают из коллекций или выделяют из накопительных культур.
2.3. Накопительные культуры выращивают на минеральной среде с испытуемым топливом без присадки; для этого зараженную минеральную среду смешивают с топливом в следующих соотношениях:
при выращивании на дизельных топливах и топливах для реактивных двигателей (в дальнейшем реактивное топливо) — по 3 мл среды и топлива;
при выращивании на бензинах— 10 мл среды и 1 мл бензина.
2.4. Заражение минеральной среды производят почвой, загрязненной нефтепродуктами, или водно-топливной смесью, пораженной микроорганизмами.
2.5. Для испытаний отбирают наиболее агрессивные штаммы чистых культур микроорганизмов и накопительные культуры, которые дают обильный рост на топливе без присадки не более чем через 14 суток культивирования. Для гриба Cladosporium resinae, допустимо получение обильного роста не более чем через 30 суток.
2.6. Для испытаний отбирают культуры, дающие одинаково обильный рост при многократных последовательных пересевах на среду с топливом без присадки.
2.7. Культуры микроорганизмов, отобранных для испытаний, хранят на среде с топливом без присадки; пересев культур производят не реже одного раза в 4 месяца, а в перерывах между пересевами хранят при 2—5°С. Число пересевов не должно превышать 10.
3.1. Материалы, реактивы, оборудование и посуда, применяемые для испытаний, приведены в приложении 1.
3.2. Посуду, вымытую и высушенную, закрывают ватными пробками, заворачивают в бумагу и стерилизуют в сушильном шкафу при 160°С в течение 2 ч.
3.3. Для выращивания культур и испытаний готовят среды в соответствии с приложением 2.
3.4. Минеральные среды для предварительного выращивания Pseudomonas aeruginosa, микобактерий, дрожжей и накопительных культур разливают в пробирки:
для испытаний реактивных и дизельных топлив — по 3 мл;
для испытаний бензинов — по 10 мл.
3.5. Для предварительного выращивания гриба Cladosporium resinae сусловый агар разливают в пробирки по 7—8 мл.
3.6. Минеральные среды, водопроводную воду и корковые пробки стерилизуют в автоклаве при 121°С (1 ати), а сусловый агар при 112°С (0,5 ати) в течение 20—30 мин.
После стерилизации сусловый агар охлаждают в наклонном положении для получения скошенной поверхности.
3.7. В пробирки со средами, приготовленными по пп. 3.3 и 3.5, добавляют испытуемое топливо без присадки (каждое в отдельную пробирку):
реактивного или дизельного топлива — 3 мл;
неэтилированного бензина — 1 мл.
В приготовленные среды с топливом пересевают пипеткой культуры бактерий, дрожжей или накопительные культуры в количестве 0,3 мл.
3.8. На скошенную поверхность суслового агара, приготовленного по пп. 3.4—3.5, пересевают бактериологической петлей гриб Cladosporium resinae, 1 петлю на пробирку,
3.9. Пробирки с пересеянными культурами помещают в термостат на 10 суток при 29±2°С для выращивания культур, которые служат посевным материалом для испытаний.
Содержание клеток в 1 мл посевного материала для культур Pseudomonas aeruginosa, микобактерий, дрожжей и накопительных культур должно быть не менее 1 ' 10е.
3.10. Для испытаний допускается использовать ранее выращенные культуры, хранящиеся в холодильнике по п. 2.7.
3.11. Для испытаний готовят суспензию спор гриба Cladosporium resinae, выращенного по п. 3.9, переносом их бактериологической петлей со скошенного суслового агара в стерильную водопроводную воду из расчета 3—4 петли на 10 мл воды.
Суспензия пригодна для использования в течение 6 ч с момента приготовления.
3.12. Для определения противомикробного действия других присадок их вносят в образцы топлив в количествах, соответствующих программе испытаний.
3.13. Минеральные среды для испытаний разливают:
для испытаний реактивных и дизельных топлив — в колбы вместимостью 100 мл по 20 мл;
для испытаний бензинов — в колбы вместимостью 250—300 мл по 50 мл.
Количество колб для испытаний каждог0 вида топлива соответствует числу видов микроорганизмов, применяемых для испытаний.
Среды в колбах стерилизуют перед испьР'аниями> как указано в п. 3.6.
4.1. В колбы со средами по п. 3.13 внс/Сят чистые культуры микроорганизмов, выращенные по п. 4.9, каждУю в отдельную колбу:
для испытаний реактивных и дизельный топлив 0,2—0,3 мл культуры;
для испытаний бензинов 0,5 мл культуры.
Одну колбу оставляют со стерильной средои (для контроля).
Культуру Pseudomonas aeruginosa для заражения среды отбирают из водного слоя; суспензию гриба CladPsPorium resinae предварительно взбалтывают.
4.2. Зараженные среды в каждой колбе взоалтывают для равномерного распределения посевного матери^ла> разливают в пробирки и смешивают с испытуемыми образ^ами в следующих соотношениях:
для реактивных и дизельных топлив — по 3 мл среды и образца;
для бензинов — 10 мл среды и 1 мл обр^ца; пробирки немедленно закупоривают корковыми пробками.
4.3. Стерильную среду разливают в про^иРки в тех же количествах, что в п. 4.2, и применяют для контррдя-
4.4. Для контроля жизнеспособности иси0ЛЬЗУемых микроорганизмов в пробирки с зараженной средой добавляют незащищенное топливо.
4.5. Для контроля изменений образцов 9а счет действия присадки в пробирки со стерильной средой добавляют защищенное топливо.
4.6. Для контроля изменений образцов счет температурного режима условий испытаний в пробирки со стерильной средой добавляют незащищенное топливо.
4.7. Пробирки, подготовленные по пп, 4.2 4.5, помещают в термостат при 29±2°С.
4.8. Образцы, зараженные грибом CU^osPorium resinae, выдерживают в термостате 21 сутки.
4.9. Образцы, зараженные Pseudomonas aeruginosa, микобактериями, дрожжами и накопительными культурами, выдерживают в термостате 7 суток при непрерывном встряхивании; для этого пробирки с образцами помещают на встряхивательный аппарат (150—300 об/мин), установленный в те/),мостате'
4.10. При появлении признаков роста микроорганизмов в образцах до указанных сроков испытания прекращают.
4.11. Параллельно испытывают не менее трех образцов.
5.1. По окончании испытаний пробирки извлекают из термостата и производят их осмотр.
5.2. Критериями биостойкости защищенных противомикробны- ми присадками топлив и противомикробных свойств присадок служат:
при испытаниях без встряхивания — прозрачность и отсутствие пигментации среды, отсутствие пленки на границе среда — топливо и осадка.
при испытаниях со встряхиванием — прозрачность и отсутствие пигментации среды, отсутствие осадка.
5.3. Топливо, защищенное противомикробной присадкой, считают стойким к воздействию микроорганизмов, а испытуемую присадку — обладающей противомикробным действием в данном топливе при следующих результатах испытаний:
в пробирках по п. 4.2 среда прозрачна и не пигментирована, отсутствует пленка на границе среда — топливо, осадка нет;
в пробирках по п. 4.4 среда мутная и (или) пигментированная, имеется пленка на границе среда — топливо (при испытаниях без встряхивания) и (или) осадок.
При наличии пленки, незначительной пигментации и (или) помутнения среды и (или) появления осадка не только в пробирках по п. 4.2, но и в пробирках по пп, 4.5 и 4.6 содержимое каждой пробирки перемешивают и микроскопируют. При отсутствии микроорганизмов наличие мутности и пигментации среды, образование пленки и осадка относят за счет изменений топлива, вызванных присадками или температурным режимом испытаний.
6.1. К работе допускают лиц, прошедших предварительный медицинский осмотр.
6.2. Поскольку испытания проводят с микроорганизмами, среди которых могут быть условнопатогенные, к ним допускают лиц, обученных работе с микроорганизмами и прошедших специальный инструктаж в учреждениях Министерства здравоохранения.
6.3. Работающие во время испытаний должны пользоваться спецодеждой: халатами и шапочками из белой хлопчатобумажной ткани, респираторами или многослойными марлевыми повязками, резиновыми передниками и перчатками. Выход в спецрдежде из рабочего помещения не допускается.
6.4. По окончании работы необходимо мыть руки и лицо теп-
ЛОИ водой с мылом.
6.5. Сотрудники должны не реже одного раза в год проходить
4 и о .
профилактический медицинскии осмотр.
6.6. Лица, страдающие хроническими катарами верхних дыха
тельных путей, а также поражением открытых участков кожи, подлежат специальному обследованию на наличие сенсибилизации к используемым в работе микроорганизмам.
6.7. Помещение, предназначенное для работы с микроорганизмами, должно быть изолированным, иметь естественное освещение и принудительную вентиляцию. Потолок и стены помещения окрашивают масляной краской и не реже одного раза в год промывают 2%-ным раствором фенола. Пол, все предметы и оборудование ежедневно подвергают влажной уборке с использованием 0,5—3,0%-ного раствора хлорамина.
6.8.