Единая система защиты от коррозии и старения. Масла и смазки. Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

Единая система защиты от коррозии и старения

МАСЛА И СМАЗКИ.

Методы лабораторных испытаний на стойкость ГОСТ
к воздействию плесневых грибов 9.052—88
Unified system of corrosion and ageing protection.
Oils and greases.
Laboratory test methods for mould resistance

ОКСТУ 0009

Дата введения 01.01.89
Настоящий стандарт распространяется на масла и смазки и устанавливает методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов:
1 — для установления грибостойкости масел и смазок при • отсутствии минеральных и органических загрязнений;
2 — для установления грибостойкости смазок в условиях, имитирующих минеральные загрязнения;
3 — для установления грибостойкости масел в условиях, имитирующих минеральные загрязнения;
4 — для установления грибостойкости масел и смазок в условиях, имитирующих минеральные и органические загрязнения.
Смазки, применяемые для оптических приборов, испытывают только методом 1.
Методы применяют при испытании масел и смазок, к которым в стандартах или технических условиях предъявляют требования грибостойкости.

1. МЕТОД 1

1.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов зараженных водной суспензией спор грибов, в условиях оптимальных для развития грибов, без дополнительного источника минерального и органического питания.
Перепечатка воспрещена
1.2. Отбор образцов
1.2.1. Масла и смазки отбирают по ГОСТ 2517—85 массой 10 — 15 г.
1.2.2. Образцами являются масла и смазки в состоянии поставки, без специальной очистки и стерилизации.
1.2.3. Количество параллельных образцов должно быть не менее пяти.
1.3. Виды грибов
1.3.1. Для испытаний применяют чистые культуры следующих видов плесневых грибов:
Aspergillus niger van Tieghem
Penicillium chrysogenum Thom
Penicillium cyclopium Westling
Scopulariopsis brevicaulis (Sacc.) Bainier
Paecilomyces varioti Bainier
1.3.2. Культуры грибов получают в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периоди­ческим пересевом и выращивают непосредственно перед испыта­ниями.
1.3.3. Пересев, выращивание и хранение культур грибов — по ГОСТ 9.048—89.
1.4. Аппаратура, материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048—89.
1.5. Подготовка к испытаниям
1.5.1. Посуду и материалы готовят по ГОСТ 9.048—89.
1.5.2. Среды для выращивания, хранения культур грибов и для испытаний готовят по ГОСТ 9.048—89.
Рецептура сред приведена в таблице.
Наименование реактива
Среда 1 (Чапека-
Докса с агаром)
Среда 2 (Чапека- Докса.с агаром без сахарозы)
Среда 3 (выщело­ченный агар)
Среда 4 (сусло-агар)
Среда 5 (минераль­ная без сахарозы)
Однозамещенный фос­форнокислый калий, г
0,7
0,7
——
—
1,0
Двузамещенный фос­форнокислый калий, г
0,3
0,3
—
—

Сернокислый магний, г
0,5
0,5
——
—
0,5
Азотнокислый натрий, г
2,0
2,0
—
—
3,0
Хлористый калий, г
0,5
0,5
—
—
2,0
Сернокислое железо, г
0,01
0,01

—
—
Сахароза, г
30,0
—.
—
—

Наименование реактива
Среда 1 (Чапека-
Докса с агаром)
Среда 2 (Чапека- Докса с агаром без сахарозы)
Среда 3 (выщело­ченный агар)
Среда 4 (сусло-агар)
Среда 5 (минераль­ная без сахарозы)
Агар-агар, г
30,0
Выщело­ченный 30,0
Выщело­ченный 30,0
30,0
—
Четырехбаллинговое не- охмеленное пивное сус­ло (4 % сахара), см3

—
—-
До 1000
—
Дистиллированная вода, см3

До 1000

— ■
—
Водопроводная вода, см3
—

—
До 1000

1.5.3. Чистые культуры грибов пересевают и выращивают по ГОСТ 9.048—89, используя грибы, приведенные в п. 1.3.1.
1.5.4. Для размещения образцов масел в чашку Петри наливают 20—30 см3 среды 3 и дают ей застыть. В застывшей среде - просверливают пять лунок глубиной около 5 мм с помощью стерильного сверла диаметром 10 мм и наливают образцы масел на 1 мм ниже уровня среды.
Образцы смазок наносят на предметные стекла, покрывая всю поверхность слоем 1,5—2,0 мм, и помещают в чашки Петри.
1.5.5. Контроль жизнеспособности спор грибов проводят по ГОСТ 9.048—89.
Для контроля жизнеспособности спор грибов в чашку Петри наливают среду 1 или 4 в количестве 20—30 см3 и дают ей застыть.
1.6. Проведение испытаний
1.6.1. Водную суспензию спор грибов готовят по ГОСТ 9.048—89, используя грибы, выращенные, как указано в п. 1.5.3.
1.6.2. Предметные стекла в чашках Петри, чашки Петри с образцами масел помещают в бокс. Поверхность образцов заражают водной суспензией спор грибов с помощью пульверизатора, не допуская слияния капель.
1.6.3. Образцы масел и смазок после заражения выдерживают 1—2 ч при температуре (25 ± 10) °С.
1.6.4. Предметные стекла в чашках Петри и чашки Петри с зараженными образцами и средами помещают в эксикатор, на дно которого налита вода. Эксикатор устанавливают в термостат с температурой (29 ± 2) °С.
1.6.5. Образцы выдерживают в термостате 56 сут.
1.6.6. Через 3—7 сут после начала испытаний осматривают контрольную чашку Петри. Если на поверхности среды развитие грибов не наблюдается, споры грибов считают нежизнеспособными. Испытания прекращают и повторяют их на новых образцах с вновь приготовленной суспензией спор из новой партии грибов.
1.6.7. Через 28 сут производят промежуточый осмотр образцов. Испытания образцов, на которых обнаруживают развитие грибов, прекращают.
1.6.8. По окончании испытаний предметные стекла в чашках Петри и чашки Петри извлекают из эксикатора и осматривают образцы.
1.7. Обработка результатов
1.7.1. Образцы смазок и масел осматривают под Микроскопом при 50—60-кратном увеличении.
1.7.2. Масла и смазки считают грибостойкими при отсутствии развития грибов на всех испытанных образцах.

2. МЕТОД 2

2.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов, зараженных суспензией спор грибов в водном растворе минеральных солей, в условиях, оптимальных для развития грибов, на среде с дополнительным источником минерального питания.
2.2. Отбор образцов — по п. 1.2.
2.3. Виды грибов — по п. 1.3.
2.4. Аппаратура, материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048—89.
2.5. Подготовка к испытаниям — по пп. 1.5.1—1.5.3, 1.5.5.
2.5.1. Для размещения образцов смазок среду 2 наливают в чашку Петри в количестве 20—30 см3 и дают ей застыть.
2.6. Проведение испытаний.
2.6.1. Суспензию спор грибов в среде 5 готовят по ГОСТ 9.048—89.
2.6.2. Смазки наносят скальпелем в количестве пяти образцов размером 10x10 мм толщиной 1,5—2,0 мм на поверхность среды в чашку Петри, подготовленную, как указано в п. 2.5.1.
2.6.3. Дальнейший порядок проведения испытаний соответствует требованиям пп. 1.6.2—1.6.4.
2.6.4. Образцы выдерживают в течение 28 сут.
2.6.5. Дальнейший порядок проведения испытаний — по пп. 1.6.6—1.6.8 с промежуточным осмотром образцов через 14 сут.
2.7. Обработка результатов — по тш. 1.7.1, 1.7.2.

3. МЕТОД 3

3.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов, зараженных суспензией спор грибов в водном растворе минеральных солей, в условиях, оптимальных для развития грибов, на среде с дополнительным источником минерального питания.
3.2. Отбор образцов — по п. 1.2.
3.3. Виды грибов — по п. 1.3.
3.4. Аппаратура, материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048—89.
3.5. Подготовка к испытаниям — по пп. 1.5.1 —1.5.3 и 1.5.5.
3.5.1. Для размещения образцов масел готовят пробирки с 2—3 см3 суспензии спор грибов в среде 5.
3.5.2. Контролем служит суспензия спор грибов в среде 5.
3.6. Проведение испытаний.
3.6.1. Суспензию спор грибов в среде 5 готовят по ГОСТ 9.048—89.
3.6.2. Образцы масел в количестве 2 см3 вносят не менее чем в пять пробирок, приготовленных, как указано в п. 3.5.1.
3.6.3. Пробирки помещают в наклонном положении под углом 30° и выдерживают в термостате при температуре (29 ± 2) °С.
3.6.4. Пробирки с образцами выдерживают в термостате 10- сут.
3.6.5. Через 5 и 7 сут осматривают образцы. Допускается отбирать пробы минеральной среды из пробирок для оценки грибостойкости биолюминесцентным методом, при этом пробирки с образцами выдерживают в термостате 3 и 5 сут.
При появлении признаков развития грибов в образцах испытания прекращают.
3.6.6. По окончании испытаний пробирки с образцами извлекают из термостата и осматривают невооруженным глазом или с помощью лупы при 2,5—5,0-кратном увеличении.
3.7. Обработка результатов.
3.7.1. Масла считаются грибостойкими, если отсутствует развитие грибов на всех испытанных образцах (отсутствует пленка на границе раздела среда — масло, в пробирках среда прозрачна и не пигментирована, нет осадка).
3.7.2. Масла считаются не стойкими к плесневым грибам, если на образцах наблюдается развитие грибов, признаком которого служит образование пленки на границе раздела среда — масло, помутнение и пигментация среды, образование осадка.
3.7.3. Допускается оценивать грибостойкость масел биолюминес­центным методом, приведенным в приложении.

4. МЕТОД 4

4.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов, зараженных суспензией спор грибов в водном растворе минеральных солей, в условиях, оптимальных для развития грибов, на среде с дополнительным источником минерального и органического питания.
4.2. Отбор образцов — по п.1.2.
4.3. Виды грибов — по п. 1.3.
4.4. Аппаратура, материалы и реактивы — по ГОСТ 9.048—89.
4.5. Подготовка к испытаниям — по пп. 1.5.1—1.5.3, 1.5.5.
4.5.1. Для размещения образцов смазок готовят чашки Петри, как указано в п. 2.5.1, используя среду 1 или 4.
4.5.2. Для размещения образцов масел готовят лунки, как указано в п. 1.5.4, используя среду 1 или 4.
4.6. Проведение испытаний — по п. 2.6.
4.6.1. Образцы выдерживают в термостате в условиях, приведен­ных в п. 1.6.4, 14 сут.
4.6.2. Промежуточный осмотр образцов производят через 7 сут после начала испытаний.
4.7. Обработка результатов — по пп. 1.7.1. и 1.7.2.
5. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ — по ГОСТ 9.048—89.

ПРИЛОЖЕНИЕ

Обязательное

БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ МЕТОД ОЦЕНКИ ГРИБОСТОЙКОСТИ

Сущность метода заключается в определении количества внутриклеточной аденоЗин-5'-трифосфорной кислоты динатриевой соли (АТФ) в минеральной среде после испытания масел на грибостойкосгь (п. 3.6 5) с помощью специфической ферментативной хемилюминесцентной реакции с использованием люциферин-люци- феразной системы светляков. Интенсивность излучаемого свечения прямо пропорцио­нальна концентрации АТФ.