ГОСТ 10444.2-94
Download document
.docx format · available to registered users
Группа Н09
Методы выявления и определения количества
Staphylococcus aureus
Food products. Methods for detection and quantity determination
of Staphylococcus aureus
МКС 07.100.30
Дата введения 1996-01-01
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП) и Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 "Продукты переработки плодов и овощей"
ВНЕСЕН Госстандартом России
2 ПРИНЯТ Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 6 от 21 октября 1994 г.)
За принятие проголосовали:
Наименование государства
Наименование национального органа по стандартизации
Азербайджанская Республика
Азгосстандарт
Республика Белоруссия
Госстандарт Белоруссии
Республика Армения
Армгосстандарт
Грузия
Грузстандарт
Республика Казахстан
Госстандарт Республики Казахстан
Киргизская Республика
Киргизстандарт
Российская Федерация
Госстандарт России
Республика Молдова
Молдовастандарт
Республика Узбекистан
Узгосстандарт
Украина
Госстандарт Украины
3 Настоящий стандарт представляет собой полный аутентичный текст ИСО 6888-83 "Общее руководство по определению Staphylococcus aureus. Метод подсчета колоний" в части определения количества Staphylococcus aureus и содержит дополнительные требования, отвечающие потребности экономики страны
4 Постановлением Государственного комитета Российской Федерации по стандартизации, метрологии и сертификации от 21 февраля 1995 г. N 76 ГОСТ 10444.2-94 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 1 января 1996 г.
Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты, кроме молока и молочных продуктов, и устанавливает методы выявления и определения количества Staphylococcus aureus (S. aureus) посевом: в жидкую селективную среду (с предварительным обогащением) и на агаризованные селективно-диагностические среды.
жидкого продукта менее 15 колониеобразующих единиц (КОЕ) S. aureus.
жидкого продукта более 15 КОЕ S. aureus.
жидкого продукта менее 150 КОЕ S. aureus.
жидкого продукта более 150 КОЕ S. aureus.
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 6672-75 Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия
ГОСТ 9284-75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия
ГОСТ 10444.1-84 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе
ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия
ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия
______________
* С 01.07.2002 г. вводится в действие ГОСТ 24104-2001.
ГОСТ 26668-85 Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов
ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов
ГОСТ 26670-91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов
ГОСТ 30425-97 Консервы. Метод определения промышленной стерильности
Методы выявления и определения НВЧ S. aureus посевом с предварительным обогащением основаны на высеве навески продукта и (или) разведении навески продукта в жидкую селективную среду, инкубировании посевов, пересеве культуральной жидкости на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды, подтверждении по биохимическим признакам принадлежности выделенных характерных колоний к S. aureus.
Методы выявления и определения количества S. aureus посевом на агаризованные селективно-диагностические среды основаны на высеве навески продукта или разведения навески продукта на агаризованную селективно-диагностическую среду, инкубировании посевов, подсчете количества характерных колоний (при определении количества S. aureus), подтверждении по биохимическим признакам принадлежности выделенных характерных колоний к S. aureus.
Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669 или по нормативно-технической документации на анализируемый продукт.
Для проведения анализа применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1, а также указанные ниже:
весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности (для взвешивания реактивов);
весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 1 кг, 4-го класса точности (для взвешивания продукта);
;
;
петля бактериологическая;
стекла предметные по ГОСТ 9284;
стекла покровные по ГОСТ 6672;
термостат с диапазоном рабочих температур 28-55 °С, позволяющий поддерживать заданную температуру с допустимой погрешностью ±1 °С;
дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК);
кальций хлористый;
сухая плазма кроличья;
толуидин синий "С";
трисаминометан.
6.1 Приготовление растворов и реактивов
6.1.1 Физиологический раствор готовят по ГОСТ 10444.1.
, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки, разливают по колбам или пробиркам и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.
, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки.
6.1.4 Раствор с объемной долей перекиси водорода 3% готовят по ГОСТ 10444.1, п.4.33.
6.1.5 Растворы и реактивы для окраски по Граму готовят по ГОСТ 10444.1, п.4.25.
, растворяют в дистиллированной воде, доводят дистиллированной водой до метки.
разливают в стерильные пробирки.
6.2 Приготовление питательных сред
6.2.1 Байрд-Паркер агар готовят по ГОСТ 10444.1, п.5.1.
6.2.2 Молочно-солевой агар готовят по ГОСТ 10444.1, п.5.4.
6.2.3 Мясо-пептонный агар (бульон) готовят по ГОСТ 10444.1, п.5.12.
мясо-пептонного бульона, приготовленного по ГОСТ 10444.1, устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 °С 6,9±0,1. Бульон разливают в колбы или пробирки и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 15 мин.
6.2.5 Среду из сухого питательного агара готовят по прописи, указанной на этикетке.
дистиллированной воды 6,1 трисаминометана и доводят по ГОСТ 10444.1 рН раствора до 9,0±0,1.
раствора толуидина синего, приготовленного по п.6.1.6, тщательно перемешивают и разливают по стерильным чашкам Петри. Допускается хранение среды при температуре (6±2) °С не более 7 сут.
6.2.7 Яично-желточно-азидный агар готовят по ГОСТ 10444.1, п.5.7.
6.2.8 Яично-желточно-солевой агар готовят по ГОСТ 10444.1, п.5.8.
6.2.9 Среда Гисса с мальтозой выпускается в сухом виде и готовится по прописи, указанной на этикетке.
7.1 Посевы для определения количества S. aureus
) продукта предполагаемое количество S. aureus или их количество, указанное в нормативно-технической документации на анализируемый продукт.
продукта или его разведения наносят на поверхность одной из сред, указанных в п.6.2: Байрд-Паркер агара, молочно-солевого агара, яично-желточно-азидного агара или яично-желточно-солевого агара. Преимущественно для посева используют Байрд-Паркер агар. Для посева продукта или каждого его разведения используют две параллельные чашки Петри со средой. Подготовку чашек Петри со средой к посеву и посев проводят по ГОСТ 26670.
7.1.3 При определении количества S. aureus по методу НВЧ высевают три последовательные навески продукта и (или) его разведения, отличающиеся по количеству продукта в них в 10 раз.
Каждую навеску продукта и (или) его разведение в трехкратной повторности высевают в колбы или пробирки с одной из сред, приготовленных по п.6.2.4.
Соотношение между количеством высеваемого продукта или его разведения и питательной средой 1:6 или 1:7.
7.2 Посевы для выявления S. aureus в определенной навеске продукта
7.2.1 При выявлении S. aureus в определенной навеске продукта или его эквивалентном разведении с предварительным обогащением эту навеску или разведение вносят в одну из питательных сред, приготовленных по п.6.2.4.
Соотношение между количеством высеваемого продукта или его эквивалентным разведением и питательной средой 1:6 или 1:7.
наносят на поверхность одной из селективно-диагностических сред, как указано в п.7.1.2.
7.3 При посеве жидких высококислотных продуктов для предотвращения снижения рН сахарного или солевого бульона на 0,5 и более рН продукта перед посевом доводят до 7,0±0,2.
При посеве твердых высококислотных продуктов доводят рН до 7,0±0,2 в посевах, или при приготовлении сахарного или солевого бульона рН устанавливают выше указанного в п.6.2.4, с учетом его последующего снижения при внесении продукта. Если высевают не твердый продукт, а его исходное разведение, то рН доводят в исходном разведении.
Доведение рН проводят асептически с помощью стерильных растворов гидроокиси натрия и соляной или лимонной кислоты, приготовленных по ГОСТ 10444.1. Количество добавляемого раствора гидроокиси натрия устанавливают опытным путем.
7.4 При анализе пищевых продуктов с большим содержанием NaCI проводят посев продукта или его исходного разведения в сахарный бульон, во всех других случаях для посева используют солевой бульон.
7.5 Посевы по пп.7.1 и 7.2 на агаризованных жидких средах инкубируют при температуре (36±1) °С в течение 48 ч. Чашки Петри с посевами инкубируют дном вверх.
7.6 Для подтверждения роста микроорганизмов в жидких средах из них после инкубирования по п.7.5 делают пересевы петлей по ГОСТ 26670 на поверхность одной из селективно-диагностических сред, указанных в п.7.1.2. Посевы инкубируют при температуре (36±1) °С в течение 24-48 ч.
7.7 Посевы по пп.7.1.2, 7.2.2, 7.6 на агаризованных средах после инкубирования просматривают и отмечают рост характерных колоний.
На Байрд-Паркер агаре колонии S. aureus выглядят черными, блестящими, 1,5-2,5 мм в диаметре, окружены зоной лецитиназной активности.
На молочно-солевом агаре колонии S. aureus круглые, слегка возвышающиеся над поверхностью агара, с ровными краями, диаметром 2-2,5
